鸡抗奶牛Y精子蛋黄抗体的制备.pdf

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1、江苏农业科学2013年第41卷第6期赵万乐，张兆旺．鸡抗奶牛Y精子蛋黄抗体的制备[J]．江苏农业科学，2013，41(6)：161—163鸡抗奶牛Y精子蛋黄抗体的制备赵万乐，张兆旺(甘肃农业大学动物科学技术学院，甘肃兰州730070)摘要：用洗涤后的奶牛Y精子与免疫佐剂1：1混合，免疫产蛋母鸡，收集免疫蛋，用水稀释法进行卵黄抗体(YAb)的分离，对提取的YAh用奶牛Y精子进行滴度测定，并对提取样品进行抗体含量、得率以及提取前后抗体效价损耗率进行测定。结果表明：卵黄中含有与奶牛Y精子作用的有效抗体(IgV)，并且能使精子发生凝集现象；水稀释法提取后抗

2、体得率为88．38％，抗体效价损耗率为12．49％。该抗体对Y精子作用的专一性有待进一步研究。关键词：奶牛Y精子；卵黄抗体中图分类号：$852．43文献标志码：A文章编号：1002—1302(2013)06—0161—02卵黄免疫球蛋白(eggyolkimmunoglobulin，IsY)也称卵黄1次，之后每隔1个月加强免疫1次。加强免疫用不完全佐抗体，是母鸡在卵的发育过程中由血清中的lSG有效转移至剂。初免5～7d后开始收集免疫蛋。卵黄而成⋯。卵黄抗体具有产量高、成本低、易于生产、不需1．5卵黄抗体的提取放血即可大量获得的优点，因此它在疾病诊断、

3、防治等诸多方参考文献[3]并加以改进，采用水稀释法对抗体进行初面得到了广泛应用。精子具有免疫原性质的发现，使人们提。卵黄中以1：6比例加入纯化水，搅拌均匀，用盐酸调pH能够用精子制成抗原去免疫机体，使其产生相应的抗体，从而值为5．0～5．2，4℃静置5h，然后4℃、10000r／rain离心达到避孕等目的。本试验以分离的奶牛Y精子作为免疫抗25rain，弃掉沉淀，收集上清液，再添加19％硫酸钠沉淀，在原，免疫产蛋母鸡，从蛋黄中提取特异的抗奶牛Y精子的抗45℃水浴中温浴5min，等沉淀溶解后用乙醇沉淀，静止过体，并用这些抗体作用于奶牛的精子，期望能达

4、到分离x、Y夜取上清液，量取容量。精子的效果。1．6精子凝集试验及抗体效价评定参考文献[4]，取小试管8支，分别标明1～8号，每管各1材料与方法加生理盐水100，取所保存的液体样品100加入到第11．1供试产蛋鸡管充分混匀后，从第1管取100IxL加入到第2管，充分混匀选用3O周龄的海兰母鸡作为供试鸡群。饲养于甘肃农后取100加入到第3管，依次倍量稀释。将第8管的业大学实验动物中心鸡舍。采用三阶笼养，整个试验期内自100稀释液弃去，然后向各管中加入奶牛Y精子样品由采食和饮水。100IxL，充分混匀，显微镜下检测。1．2精子样品1．7IsY含量及回收

5、率的测定本试验所用奶牛Y精子样品均为购自大连金弘基种畜参考文献[5]，采用紫外分光光度法，以生理盐水为对有限公司生产分离的奶牛Y精子。照，分别测定260am和280nm处的光吸收值，根据公式：1．3精子免疫原的制备IgY浓度(mg／mL)=1．50s0n一0．75D260液化后的奶牛精液用稀释液(配方：葡萄糖5g、乙二胺计算出原卵黄中和样品中的IgY含量，并计算得率。四乙酸二钠0．1g、柠檬酸钠0．3g、蒸馏水100mL)稀释，1．8蛋黄液提取前后抗体总量及抗体损耗率计算2000r／rain离心10rain，弃上清液。用稀释液压集精子，参照文献[3

6、]，将提取的YAb溶液测得的抗体效价分别2000r／min离心10rain，如此洗涤4次至上清无蛋白。用稀乘以所提取的总量，得到提取后的抗体总量，再用提取前的抗释液较正精子密度为4OO×10／L。体总量减去提取后的抗体总量，得到的结果即为提纯过程的1．4免疫损耗量。取试验用母鸡5只，胸肌5点注射与完全佐剂1：1混合1．9保存期测定的精子抗原进行初免。初免后的第2、4、6周各加强免疫抗体放置冰箱(4—8oC)保存8个月，观察其物理性状，并接种肉汤培养基作无菌检查。收稿日期：2012—11—292结果基金项目：甘肃省农牧厅生物技术研究与开发应用项目(编

7、号：2。1抗体对精子的凝集情况GNsW一2009—05)。由图1至图3可以看出，在不加入IgY时，精子较分散，作者简介：赵万乐(1987一)，男，山西晋城人，硕士研究生，研究方向为动物繁殖。E—mai1：503587578@qq．13011。没有发生精子凝集现象(图1)；当加入未免疫母鸡蛋黄中提通信作者：张兆旺，博士，教授，研究方向为动物繁殖。E—mail：取的IgY后，精子也不发生凝集(图2)；当加入从免疫母鸡蛋zhangzhaowang@gsau．edu．cao黄中提取的IsY后，精子密度明显增大，精子发生较明显的凝江苏农业科学2013年第41

8、卷第6期一163一宋德荣，王嘉福，周大荣，等．贵州黑马羊新品种培育[J]．江苏农业科学，2013，41(6)：163—16