静注人免疫球蛋白抗补体活性测定影响因素的探讨.pdf

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1、中国医药生物技术2010年6月第5卷第3期ChinMedBioteclmol，June2010,Vo1．5，No．3·技术与方法·DOI：10．3969／cmbad．issn．1673·713X．2010．03．013静注人免疫球蛋白抗补体活性测定影响因素的探讨王宗刚，卢元志，张慧兰静注人免疫球蛋白(pH4)(WIG)是我公司生产的具的阿氏液混合，无菌分装于试管中，4℃保存1周后方可有多种抗体活性的血液制品，因具有广泛的应用价值而受到使用。如未污染细菌可用4周。临床重视。其低pH值能更好地保证Fc段生物学活性，1．3检测方法一般认为少量的IgG多聚体能暴露出Fc段补体结合位1．3．1

2、ACA测定按照中国药典2005年版三部附录点，从而促使抗补体活性(ACA)产生_l。】。ACA是IVIGIXK中的方法测试3批样品。中一项重要的指标，它指IVIG中IgG多聚体在没有结合1．3．2多聚体含量测定采用中国药典20o5年版三部附抗原的情况下，激活补体的能力。IgG多聚体通过激活补体录IIIB高效液相色谱法(HPLC)进行分析，根据峰面积使补体消耗，从而使机体的免疫防御能力下降。头痛、潮红、计算IgG多聚体含量。颤抖、背痛、恶心是较常见的不良反应症状l4l。因此，ACA的高低对IVIG的质量起着至关重要的作用。据文献报2结果道f5】，影响ACA的因素可能与IgG多聚体含量、

3、Na浓2．1IgG多聚体含量对ACA测定的影响度、pH值、葡萄糖的浓度有关。据此，我们进行了研究。将3批IVIG样品放入60℃恒温水浴中加热，使之另外，还研究发现枸橼酸含量对ACA也有～定影响。本文产生IgG多聚体，每隔一定时间取样对其IgG多聚体就以上因素对其进行实验分析。含量和ACA测定，结果见表1。结果表明，3批IVIG的IgG多聚体含量对ACA测定的影响无显著差异(P>1材料和方法0．05)。1．1实验材料2．2Na浓度对ACA测定的影响1．1．试剂氯化钠购白天津海光药业有限公司；葡萄糖将3批IVIG样品中加入不同浓度的NaCl，将pH购白天津海光药业有限公司；枸橼酸购自湖南

4、尔康制药有限值调至7．1(等电点)，测定其ACA，结果见表2。3批检公司：钙镁离子贮备液、巴比妥缓冲贮备液、明胶巴比妥缓测结果均表明，随着Na浓度的增加，WIG样品中ACA冲液、阿氏液均自制；IVIG(pH4)样品为本公司用低温乙有下降趋势。由此可见，Na浓度对ACA测定有一定的醇分离法生产的，随机抽取3批，批号分别为20090101、影响。加o90412、20090619。2．3pH值对ACA测定的影响1．1．2仪器721型可见分光光度计为上海第三分析仪器将3批IVIG样品pH值调整前和调至7．1后测定厂产品；501型超级恒温水浴箱为上海市实验仪器总厂产ACA，结果见表3。结果表明

5、，随着pH值增加至IVIG等品；660PH计为上海英格仪器厂产品；LambdaBIO紫外分电点，ACA有一定程度的降低。由此可见，不同pH值对光光度计为美国PE公司产品。ACA的测定有一定影响。1．1．3实验动物15只豚鼠，雄性，年龄40d，体重400～2．4不同浓度的葡萄糖对AOA测定的影响500g，健康状况良好；兔子，2个月龄，雄性，体重1200将3批IVIG样品中分别加入不同浓度葡萄糖做保1500g，健康良好；绵羊，雄性，体重33，健康。以上护剂，测定其ACA，结果见表4。结果表明，加入浓度为动物均由山西康宝生物制品股份有限公司提供。5％的葡萄糖做保护剂时ACA最低。此结果与文

6、献嘲中结1．2实验方法果一致。1．2．1豚鼠血清(补体)的制备对豚鼠进行心脏采血，2．5枸橼酸对ACA测定的影响放入大试管中，待血凝固后，取出血清，4℃离心除去血将3批IVIG样品中分别加入不同浓度枸橼酸，测定细胞，制备混合血清，尽快分装，一70℃保存，也可冻干其ACA，结果见表5。结果表明，加入枸橼酸可以使ACA保存。豚鼠血清每1ml中的补体总活性应不低于200升高。CHs0。1．2．2溶血素兔抗羊红血球血清。用羊红血球免疫兔子，作者单位：046011长治，山西康宝生物制品股份有限公司使兔子产生抗体，分离血清制得。通讯作者：王宗刚，Emil：wngznggng@163．com1．2

7、．3绵羊红血球由绵羊颈静脉无菌采集全血与等体积收稿日期：2009．11—12中国医药生物技术2010年6月第5卷第3期ChinMedBiotechnol，June2010，Vo1．5，No．3225表2Na+浓度和ACA的关系表3pH值和ACA的关系表4葡萄糖浓度和ACA的关系表5枸橼酸浓度和ACA的关系3讨论】BloodTransfusion，2001，14(4)：201—204．(inChinese)王箐舟，程雅琴．国内静注丙种球蛋白Fc段生物学功能研