酵母培养物水溶物对离体草鱼肠道黏膜细胞生长及细胞膜完整性的影响.pdf

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1、动物营养学报2014，26(11)：3478—3484ChineseJournalofAnimalNutritiondoi：10．3969／j．issn．1006—267x．2014．11．038酵母培养物水溶物对离体草鱼肠道黏膜细胞生长及细胞膜完整性的影响姚仕彬叶元土蔡春芳张宝彤董娇娇黄雨薇陈科全(1．苏州大学基础医学与生物科学学院，江苏省水产动物营养重点试验室，苏州215123；2．北京市营养源研究所系统营养工程技术研究中心，北京100069)摘要：本试验以酵母培养物水溶物为试验材料，添加于离体草鱼肠道黏膜细胞培养液中，研究酵母培养物水溶物在不同浓

2、度、不同作用时间下对细胞生长及细胞膜完整性的影响。采用单因子试验设计，设1个对照组及5个酵母培养物水溶物组(Yc—l～5组)，各组均设96个重复，每个重复为1个培养孔。对照组的培养液中不添加酵母培养物水溶物，YC—l一5组的培养液中酵母培养物水溶物的浓度分别为l0、25、50、100、200mg／L。结果表明：培养液中添加50～200mg／L酵母培养物水溶物对细胞形态无损伤，100—200mg／L酵母培养物水溶物在添加后3h时显著增强细胞活性(P<0．05)，50mg／L酵母培养物水溶物在添加后6h时显著增强细胞活性(P<0．05)。与对照组相比，3h

3、时各酵母培养物水溶物组培养液中乳酶脱氢酶(LDH)活力均没有显著变化(P>0．05)，6h时YC一4、YC一5组显著降低(P<0．05)，9h时YC一3、YC一4、YC一5组显著降低(P<0．05)，12h时YC一2、YC一3、YC一4、YC一5组显著降低(P<0．05)。各时间点(3、6、9、12h)各酵母培养物水溶物组培养液中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活力与对照组相比均没有显著变化(P>0．05)，但在6～9h时GPT活力均低于对照组。由此得出，培养液中添加10—200mg／L酵母培养物水溶物能促进离体草鱼肠道黏膜细胞的生长，保护细

4、胞膜的完整性，其发挥保护作用的适宜浓度为50～200mg／L。关键词：草鱼；肠道黏膜细胞；酵母培养物水溶物；细胞生长；细胞膜完整性中图分类号：$963文献标识码：A文章编号：1006—267X(2014)11—3478—07酵母培养物(yeastculture，YC)是在特定工艺改善肠道黏膜状态，提高肠绒毛高度及肠壁厚条件控制下由酵母在特制的培养基上经过充分厌度；另一方面通过提高肠道pH稳定性途径促氧发酵所形成的微生态制品，其主要由酵母细胞进肠道有效益生菌的繁殖，从而保护肠道。酵代谢产物、经过发酵后变异的培养基以及少量的母培养物中营养物质对鱼体肠道细胞

5、直接的保护已无活性的酵母细胞所构成』。酵母培养物添作用未曾见报道。此外，使用养殖试验方法研究加到水产饲料中有助于提高鱼体的增重率，降低酵母培养物对鱼体肠道保护作用存在试验周期饲料系数，修复肝胰脏损伤-。J。肠道作为营养吸长、影响因素复杂等缺点，而使用细胞培养方法则收的主要器官，极易受到饲料中有害物质的损有试验周期短、影响因素可控的优点，有助于研究伤_5。在肠道保护方面，酵母培养物一方面通过酵母培养物对有害物质损伤肠道的修复作用机理提供营养物质直接促进肠道有益菌的增生繁殖，及作用浓度。因酵母培养物有效物质成分为其代收稿日期：2014-05—14基金项目：

6、国家自然科学基金项目(31172417)；苏州市应用基础(农业)项目(N313401210)作者简介：姚仕彬(1986一)，男，四川成都人，硕士研究生，从事水产动物营养与饲料研究。E—mail：yaoshibin2006@163．com通讯作者：叶元土，教授，硕士生导师，E—mail：yeyt@suda．edu．cnl1期姚仕彬等：酵母培养物水溶物对离体草鱼肠道黏膜细胞生长及细胞膜完整性的影响谢产物，同时细胞培养中有防止细菌引入的要求，注射器(10mL)吸取D．Hanks液冲洗肠段内腔3～需要获得无菌酵母培养物代谢产物。因此，本试4次；采用机械刮取获得

7、肠道黏膜组织，加入胶原验在草鱼(Ctenopharyngodonidella)肠道黏膜细胞酶I、Ⅳ联合消化液(含有胶原酶I、Ⅳ各分离与原代培养技术方法的基础上，以水溶解0．1mg／mL的D·Hanks液，0．22Ixm过滤，一20℃酵母培养物，通过过滤除菌手段获得酵母培养物贮存)，28oC振荡消化30min后，立即加入终止液的有效成分，得到含不同浓度酵母培养物水溶物(按消化液：胎牛血清=19：1的比例配制而成)终的细胞培养液，添加在离体肠道黏膜细胞的培养止消化，玻璃吸管反复吹打5min后静止lmin，吸液中，以观察酵母培养物水溶物对离体草鱼肠道取上层细

8、胞悬液为原代黏膜细胞(细胞团)液。原黏膜细胞生长及细胞膜完整性的影响，为研究酵代黏膜细胞(细胞