核受体辅激活蛋白5在肝细胞癌患者中的表达及其临床意义.pdf

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1、实用医学杂志2014年第3O卷第l9期核受体辅激活蛋白5在肝细胞癌患者中的表达及其临床意义张华鹏方红波曹胜利阎冰郭文治张水军摘要目的：探讨核受体辅激活蛋白5(NCOA5)在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)癌组织、癌旁组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法：采用蛋白质免疫印迹技术(Westemblot)检测64例肝细胞癌患者癌组织、癌旁组织中NCOA5蛋白表达水平，并与临床病理资料进行统计学分析结果：Westernblot分析结果显示NCOA5蛋白在肝细胞癌组织的表达水平(0．27±0．10)明显低于癌旁组织(0．68±0．06)(P<0．0

2、5)；NCOA5蛋白在肝细胞癌组织中的表达与肿瘤直径、门静脉癌栓、复发转移及分化程度等因素有关(P<0．05)。结论：肝细胞癌患者癌组织中NCOA5蛋白表达水平明显低于癌旁组织．提示NCOA5的低表达与肝癌的发生发展密切相关，且其可能在肝细胞癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要的作用。关键词肝细胞癌：核受体辅激活蛋白5：蛋白质免疫印迹技术核受体辅激活蛋白5(NCOA5)是一种由579京市六一仪器厂，PVDF膜购自美国ROCHE公司，个氨基酸组成的广泛表达的核受体辅助调节因C—DiGit化学发光扫描仪购自美国LI—COR公司。子，也是孤核激素孤儿受体BD73的辅激活蛋白。1．3We

3、sternblot方法检测NCOA5蛋白的表达最新的研究表明NCOA5基因缺陷可能与小鼠肝将液氮中的组织标本取出，切取约50mg，加入癌的发生有关，且其表达水平在小鼠肿瘤组织与RIPA裂解液抽提总蛋白，BSA法绘制蛋白浓度标癌旁组织中有显著变化，但其在人体肝癌组织中准曲线，测定提取的蛋白浓度，并将提取的蛋白与的表达水平报道尚很少⋯。本研究通过WesternSDS上样缓冲液混合后100℃煮沸5min。灌制blot方法检测肝细胞肝癌、癌旁组织中NCOA5蛋10％的SDS一聚丙烯酰胺分离胶和5％的SDS一聚白的表达水平，探讨其在肝癌的发生和进展中的丙烯酰胺浓缩胶，电泳槽中加入Tris一甘

4、氨酸电泳作用，以期为肝癌的诊治提供新的思路。缓冲液，每孔上样15L，第1个泳道加人标准蛋1资料与方法白Marker。电泳2h后以湿转法将蛋白转印于1．1一般资料选取郑州大学第一附属医院肝胆PVDF膜上，5％脱脂奶粉封闭抗原后加入NCOA5胰外科2012年2月至2013年2月手术切除的64山羊抗人多克隆抗体(1：1000稀释)的5％脱脂奶例肝癌患者标本，均有癌组织和相应的癌旁组织粉中4℃过夜。次日洗膜后加入辣根过氧化物酶标(距癌组织2em认定为癌旁组织)，标本离体后立记的兔抗山羊IgG二抗(1：5000稀释)，室温下摇即置于灭活RNA酶的冻存管中液氮冷冻保存。然床上孵育1h，ECL化

5、学发光检测杂交信号．扫膜后冻存到一80℃低温冰箱中。上述所有标本均取自仪成像并保存。采用AdobePhotoshopCS5分析其首次切除的肝癌患者。术前均未接受放疗、化疗或图像灰度值，其中NCOA5蛋白的表达水平用B．其他抗癌治疗。且术后病理均证实为肝细胞癌。本Aetin蛋白的表达量来校正。研究经郑州大学第一附属医院伦理委员会通过。1．4统计学方法采用SPSS17．0统计软件分析。1．2材料和试剂NCOA5山羊抗人多克隆抗体所有数值变量均采用±s表示，均数比较采用t购自SantaCruz公司，B—Actin鼠抗人单克隆抗体检验或方差分析，o【=0．05。购自美国Sigma公司，辣根

6、酶标记兔抗山羊IgG二2结果抗、辣根酶标记山羊抗小鼠IgG二抗购自北京中2．1Westernblot方法检测NCOA5蛋白表达情况杉金桥生物技术有限公司，转膜仪、电泳仪购自北NCOA5蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达量分别为0．27±0．10．0．68±0．06，肝癌组织中NCOA5蛋白的表达水平明显低于癌旁组织(P

7、军E—mail：zhangshuun@zzu．edu．cn关系通过检测64例患者肝细胞癌、癌旁组织中实用医学杂志2014年第3O卷第19期C2找一个可靠的肿瘤标记物预测肝癌的发生与发展意义重大。NCOA5

8、辩懈已有研究发现NCOA5在人类细胞中是通过雌激素受体介导的转录实现调控的，NCOA5基因缺陷可导致男性肝癌和糖尿病的同时发生，而NCOA5表达缺陷既可诱发雄性小鼠原发性肝癌，又能导致小鼠糖耐量减退[1,5-61。本研究在人体标本注：N，癌旁组织；C，肝癌组织中进一