海藻糖应用于哺乳动物卵母细胞冷冻保存的研究进展.pdf

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1、中固冲2015·7REPRoDUCT10N&BREEDING圈海藻糖应用于I：l：J7L,动物卵母细胞冷冻保存的研究进展张华林，史蕾，熊家军，李翔，吴灿杰，杨利国(华中农业大学动物科技学院农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉430070)中图分类号：S823．3文献标识码：A文章编号：1004—4264(2015)07—0021—05摘要：海藻糖是一种广泛存在、化学性质稳定的非还原性糖，参与构成细胞膜蛋白质结构，常作为冷冻保护剂应用于卵母细胞的超低温冷冻保存。本文主要围绕哺乳动物卵母细胞的冷冻研究现状和海藻糖在哺乳动物卵母细胞玻璃化冷冻中的应用进行简要阐述。关键词：海藻糖；

2、玻璃化冷冻；哺乳动物；卵母细胞利用超低温冷冻方法将大量卵母细胞保存起来，Whittingham首次成功冷冻保存了小鼠的成熟卯母细建立“卵子库”是保护物种资源和拯救濒危动物的有效胞，解冻受精后获得后代⋯；1985年，RalI和Fahy发手段之一，同时也是实施胚胎工程技术、加快家畜品种明了玻璃化冷冻法，并成功应用于小鼠8一细胞胚胎的改良的重要手段。目前卵母细胞的冷冻保存技术还不完冷冻保存[2】，成为日母细胞冷冻保存领域里程碑式的善，尚处于研究摸索阶段。本文主要围绕哺乳动物卵进步。母细胞的冷冻研究现状和海藻糖在哺乳动物卵母细胞卯母细胞常规冷冻法即慢速冷冻法，一般是利用玻璃化冷冻中的应用研

3、究进行简要阐述。抗冻保护剂，经过由低浓度到高浓度的抗冻保护剂处理后，投入液氦中保存，其主要目的是使卵母细胞逐步适1卵母细胞冷冻保存现状应高浓度的抗冻保护剂，使抗冻保护剂能充分渗透到细卵母细胞冷冻的成功与否主要取决于其复苏后的胞中去。由于该法在冷冻过程中会形成冰晶，容易损伤形态和生理功能的恢复程度。与精子和胚胎相比，卯母细胞，而且操作复杂、耗时长，并需要昂贵的降温设细胞是体积最大的单细胞，胞质相对丰富，细胞器结备，在生产中推广应用受到很大限制。玻璃化冷冻保存构复杂且含水量高，因此对超低温处理更敏感，冷冻是先用高浓度的抗冻保护剂溶液处理待冷冻的细胞，置时不易充分脱水，易形成冰晶造成细胞

4、膜和细胞器损换部分水分，然后进行冷冻。在直接投入液氮的急速冷伤和破裂，这些因素导致其冷冻非常困难。1977年，却过程中，液体的黏度进一步增加，当黏度达到临界值时发生凝固化，即由半固态再过渡到固态，这种呈现透收稿日期：2015—01—30明玻璃化状态的固态物质能保持液态时的正常分子与离基金项目：现代农业产业技术体系岗位(CARS一37—04B)；农业子分布，在细胞内起到很好的保护作用，比常规慢速冷部948计划重点项目(2011一G26)；国际合作重大专项(2011DFA32250)。冻更简单、快捷、有效。近年来玻璃化冷冻保存技术发作者简介：张华林(1984一)，男，博士研究生，研究方

5、向为动物生殖展十分迅速，冷冻效率得到很大提高_3祁】。玻璃化冷冻生理与生物技术。通讯作者：杨利国(1962一)，男，教授。博导。成功与否与玻璃化溶液有很大关系，如何选择适宜的冷中圈斗2015·7Rl1二PR0DUCT10N&BREl￡DING团胞，并且解冻后的存活率、受精率及胚胎发育率与未冷采用开放式细管(OPS)玻璃化冷冻保存牛卵母细胞冻的对照组并无显著差异。Sanchez—Partida等人在核胚胎时发现，在冷冻液中添加海藻糖做保护剂更有利常规含有蔗糖的冷冻保护剂中加入辅助性的海藻糖，对于二者解冻后的发育效果。最近的研究表明，用含小鼠口母细胞进行冷冻，其中01mol／L组和0．

6、3mol／L组0．4mol／L海藻糖、35％乙二醇和5％PVP溶液玻璃化冷相较0．2mol／L组冷冻效果更好，解冻后的卵母细胞经过冻牛卵母细胞，虽然解冻后卵母细胞体外受精或孤雌激体外成熟培养和体外受精后，将发育到2一细胞的胚胎活的卯裂率和囊胚发育率明显低于对照组，然而这些卵移植入小鼠体内，成功获得了后代，并且后代具有正常母细胞用于构建体细胞核移植胚胎时，胚胎的发育情况的生殖能力[38]0最新的研究表明，广泛用于生产转基因与利用新鲜的卯母细胞相比没有区别_4。Atabay用同和基因敲除的C57BL／6J小鼠，由于其是高度近交品系种配方冷冻液冷冻牛的卵母细胞，这些卵母细胞解冻后小鼠，卯

7、母细胞冷冻保存后的成活率和发育能力会显著形态正常率达到80％，并且可以成功用于牛和水牛的降低，Kohaya等利用海藻糖作冷冻保护剂，成功玻璃种间克隆胚胎的构建和早期发育。Abe研究发现，海化冷冻冻卯母细胞，并将卵母细胞解冻后移植到代孕小藻糖用作保护剂玻璃化冷冻牛卵母细胞可以大幅度减少鼠，首次得到健康后代l3。这些在小鼠上的研究表明海卵母细胞细胞器受到的伤害，显著提高其解冻后体外生藻糖是一种优良的玻璃化冷冻保护剂。产胚胎的囊胚率_4。Gasparrini在研究玻璃化冷冻