海藻酸钠寡糖抗氧化活性的研究.pdf

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1、第36卷第3期大连大学学报Vbl_36No．32015年O6月JOURNAL0FDALIANUNIVERSITYJun．2015海藻酸钠寡糖抗氧化活性的研究吴海歌，王雪伟，李倩，姚子昂(大连大学生命科学与技术学院，辽宁大连，116622)摘要：海藻酸钠是一种来源广泛、具有多种生物活性的海洋多糖。本实验通过酸解法制备海藻酸钠寡糖(AOS)，在检测其体外自由基清除能力与抗氧化能力的基础上，建立海藻酸钠寡糖预保护与过氧化氢氧化损伤细胞模型，进而从细胞形态与活性、胞内活性氧(ROS)清除率、关键氧化还原酶酶活等不同水平进行检测，结果表明海藻酸钠寡糖对小胶质细胞有保护作用，能够有效的清除

2、胞内活性氧水平，维持细胞正常形态，提高超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH．Px)的酶活，一定程度缓解了过氧化氢对细胞的氧化损伤。这为进一步研究海藻酸钠寡糖在由小胶质细胞应激引起的神经退行性疾病中的应用提供了参考。关键词：海藻酸钠寡糖；抗氧化；小胶质细胞中图分类号；Q539文献标识码：A文章编号：1008．2395(2015)03-0070．06收稿日期：2015．04．22作者简介：吴海歌(1976．)，女，博士，副教授，研究方向：海洋生物学。本实验利用酸解的方法制各海藻酸钠寡糖，并从0引言细胞外与细胞内两方面研究了制备的海藻酸钠寡糖的抗氧化作用，以期为其在与

3、氧化应激相关疾病中的海藻酸钠是海带等褐藻类植物细胞壁的主要组应用提供科学依据。成成分，来源广泛，由古洛糖醛酸(G)和甘露糖醛酸(M)相邻或交替排列【JJ。其凝胶型强、粘度大、1材料与方法水溶性差等特性限制了海藻酸钠在生物医药领域的应用，而其降解产物海藻酸钠寡糖除了具有相对于海1．1材料与试剂藻酸钠本身分子量低、易吸收等优点外，还具有增强海藻酸钠：国药集团化学试剂有限公司：超氧化生物体外非特异性免疫的作用，同时海藻酸钠寡糖暴物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)试剂盒、谷露的共轭烯酸结构还加强了其对自由基的清除能力胱甘肽过氧化物酶(glutathioneper

4、oxidase，GSHPx)J。还有研究表明，海藻酸钠寡糖对抗氧化酶活性L3J试剂盒均购于南京建成科技有限公司。N9小胶质细和细胞膜脂质过氧化作用【4J有一定的影响。胞：第三军医大学，白云军医惠赠。IMDM培养基、小胶质细胞隶属单核吞噬细胞族，被广泛认为是2，7．二氯荧光素：Sigma公司。中枢神经系统内的主要免疫效应器，在中枢神经系统发育完成后转换为静止小胶质细胞【5]。当中枢神经系1．2方法统损伤时，静止小胶质细胞被激活成巨噬细胞，识别1．2．1海藻酸钠寡糖的制备抗原特性增强，吞噬异物并分泌活性成分，促进受损实验方法参考文献[9】并加以改进。称取海藻酸钠神经的恢复【6】。然

5、而被激活的小胶质细胞会产生活性15g，溶于1000mL体积分数为0．3％的盐酸中，配氧(ROS)导致神经的损伤和变性J，这有可能与某制成质量分数1．5％的海藻酸钠．盐酸混合液，搅拌至些疾病如阿尔茨海默病(alzheimer’Sdisease，AD)其溶解，9O℃降解24h后，4000r／min离心30min，和帕金森症(parkinson’Sdisease，PD)有关，有研究保留上清液中和至中性(pH=7．0)。使用截留分子量认为这些神经退行性疾病与高氧化应激相关]。因此，为100D的透析袋除盐，喷雾干燥获得海藻酸钠寡糖寻找抑制小胶质细胞活化的药物可能是治疗神经退粉末。行性疾病

6、潜在的方法。第3期吴海毒晚等：海藻酸钠寡糖抗氧化活性的研究71将制备的海藻酸钠寡糖称取0．1g溶于10mL蒸制不同浓度的样品，依次加入2．5mL磷酸缓冲液馏水中，按照3，5．二硝基水杨酸(DNS)法测定还原(pH=6．6)，2．5mL质量分数为1％的铁氰化钾溶液，糖含量A(~tmol／L)；按硫酸苯酚法测总糖含量B混合均匀后置于37℃恒温水浴锅中反应30min。取(mg／L)【】，并计算其平均相对分子质量Ma：出后加入三氯乙酸溶液，混匀，3000r／min离心1OR分钟。取2mL上清液于另一试管中，加入等体积的Ma=二×l000A三氯化铁溶液，摇匀并静置5min于700nm下测

7、吸光度。实验中海藻酸钠寡糖的终浓度为1．2．2海藻酸钠寡糖细胞外抗氧化实验50，100，200，400~tg／mL。对照组为维生素C，终浓度(1)总抗氧化能力检测为25pg／mL。实验重复三次，结果取平均值。实验采用钼酸铵法测定海藻酸钠寡糖的总抗氧化能力[¨]，分别称取磷酸钠2．13g、钼酸铵0．99g、1．2_3海藻酸钠寡糖细胞内抗氧化实验硫酸6．67mL溶于200mL水中，混匀。取0．5mL不(1)小胶质细胞的培养同浓度的海藻酸钠寡糖溶液加入到5mL钼酸铵反应实验用小胶质细胞均在液氮中冻