高效液相色谱法同时测定双黄连粉针剂中5种组分含量的方法分析.pdf

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1、I1．JournalofChinaPrescriptionDrugVo1．13No．2实验研究．35李玉囡(天津市胸科医院，天津300222)【摘要】目的建立以高效液相色谱法(HPLC)测定双黄连注射剂中5种组分含量的方法。方法样品双黄连粉针剂以乙腈一1％冰醋酸水溶液作梯度洗脱，检测波长为327nm；流速为1mL／min柱温35℃。在PhenomenexC18柱(4．6mm×250mm，5pm)色谱柱上洗脱，外标法定量。结果①样品中各指标成分分离良好，分离度大于2；②黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿

2、原酸5种组分在各自的浓度范围内呈良好的线性关系，r值分别为0．9994，0．9991，0．9997，0．9998，0．9998；③精密度试验：按峰面积计算黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸的RSD值依次为0．7995％、1．763％、1．905％、1．643％、1．908％；④重现性试验：黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸的RSD值依次为1．1l1％、1．393％、1．355％、1．473％、1．695％；⑤回收率实验：平均加样回收率分别为100．3％，RSD=1．3％，100．9％，RSD

3、=1．7％，101．2％，RSD=0．9％，100．7‰RSD=1．6％，100．8％，RSD=1．0％(n=3)；⑥双黄连注射剂稳定性好，在12h内可进行准确的定量分析。结论HPLC测定双黄连注射剂中5种组分含量的方法简便灵敏，各指标成分分离良好，精密度较高，重复性好，回收率也较高，线性关系良好，是双黄连粉针剂质量控制的一种较好的方法。另外，双黄连注射剂稳定性好，在12h内可进行准确的定量分析。【关键词】双黄连粉针剂；HPLC；含量分析方法中药复方中的多种成分相互协同，达到治病的功效。因此，浓度(C)

4、分别为1004，960，520，500，890~g／mL，将储备液放置应尽可能明确药物的成分和测定各成分的含量，有利于达到实冰箱低温保存。现中药复方有效质控的目的。例如双黄连粉针主要由连翘、金2．2．2供试品溶液制备银花、黄芩三种药物制成，其主要功效疏风解表，清热解毒，治疗精密称取双黄连粉针剂样品(批号：0710010)10．0mg置急性上呼吸道感染、轻型肺炎等病症】。双黄连粉针剂组分含10mL容量瓶中，加70％甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀即量测定的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、TLCS(薄层

5、扫得。描法)、uv(紫外分光光度法)等。有文献通过HPLC法同时测2．2．3阴性供试品溶液制备定该制剂2或3种组分含量口】。但质量评价覆盖面窄，也没有按处方制备除金银花。黄芩和连翘的阴性对照样品，按报道同时测定5种组分含量的方法。本实验采用HPLC，利用“2．2．2”项下制备阴性供试品溶液。梯度洗脱对其黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸5种2．2．4系统性试验组分予以测定，旨在为双黄连粉针剂的质量控制和方法学研究在上述色谱条件下，黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿方面提供可信依据。原酸的理论塔板

6、数均大于2500。阴性供试品溶液不干扰测定，1仪器与试剂样品中各指标成分分离良好，分离度大于2。1．1仪器2．2．5线性关系考察Agilentl10全自动液相色谱仪系统(四元梯度泵，二极管检精密吸取5种对照品储备溶液置5mL容量瓶中，按稀释的测器)(美国安捷伦公司)；SZ一93自动双重纯水蒸馏器(t-海强方法配置一系列线性混合标准溶液，混合标准溶液组成见表1。运科技有限公司)：WH一2微型漩涡混合仪(上海沪西分析仪器取线性混合标准溶液10，在上述色谱条件下分别进样，记录厂有限公司)。各组色谱峰面积，以峰

7、面积为纵坐标样品组分浓度为横坐标进1．2试剂行线性回归，黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、咖啡酸和绿原酸的标准双黄连粉针剂(哈药集团中药二厂，批号：0710010—曲线及线性回归方程见表2。0712003)；黄芩苷对照品(批号：715—8501)，野黄芩苷对照品(批表1：混合标准溶液组成情况号：110842—200605)，黄芩素对照品(批号：111595—200604)，咖啡酸对照品(110885—200102)，绿原酸对照品(110753—200413)(中国药品生物制品检定所)；乙腈为色谱纯(天津市康科德

8、科技有限公司)；甲醇为色谱纯(天津市康科德科技有限公司)；水为纯化水；冰醋酸为分析纯；其他试剂为分析纯。2方法与结果2．1色谱条件色谱柱：PhenomenexC18柱(4．6mm×250mm，5rtm)；流动相：乙腈(A)一1％冰醋酸水溶液(B)(A+B=100％)作梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1；检测波长为327nm；流速为1mL／min；柱温35℃。2．2方法2．2．1对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品25．1mg置25mL容量瓶中，加