肝癌患者外周血 CD4、CD25以及调节性 T细胞的临床研究.pdf

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1、·960·ChineseHepatology，Dec．2014，Vo1．19，No．12·临床与基础研究·肝癌患者外周血CD4、CD25以及调节性T细胞的临床研究郭晓东杨美余灵祥郭超楠熊璐【摘要】目的对肝癌患者外周血CD4、CD25以及调节性T细胞进行临床研究分析。方法选择20l1年2月至2013年5月于我院治疗的肝癌患者5()例肝癌患者作为观察组，另选择50例健康人群作为对照组，检测并比较CD4、CD25以及调节性T细胞在两组病例中的表达情况。结果观察组CD4CD25Tr占CD4T细胞比例明显高于对照组，且观察组Ⅲ、Ⅳ

2、期明显高于I、Ⅱ期，差异有统计学意义(P<0．O5)。经过大剂量IL一2、CD3以及PBMCs的不断刺激后，CD4CD25Tr以及cD4CD25T能够在体外进行培养并且进行扩增。观察组与对照组CD4CD25Tr增殖能力明显弱于CD4cD25T细胞(P<0．05)，然而两组之间比较无较大差异(P>0．05)。体外增殖抑制试验结果表明CD4CD25Tr能够明显抑制CD4CD25T细胞增殖，当两种细胞数目相同时，两组中两种细胞比例为1：1时，其抑制率最高，且观察组抑制率明显高于对照组，差异有统计学意义(P％0．05)。结论CD

3、4CD25Tr细胞能够抑制肝癌患者的免疫功能，且与肝癌发展密切相关，进一步提示清除CD4CD25Tr细胞能够提高治疗肝癌的效果。研究CD4CD25Tr细胞相关功能及作用机制，可为肝癌治疗提供新的靶点。【关键词】肝癌．夕周血；CD4；CD25；调节性T细胞肝癌是现今世界上分布较为广泛的恶性肿瘤之选择2011年2月至2013年5月于我院治疗的一，其{台疗原则主要是以外科为主的综合性治疗方5O例肝癌患者作为观察组，另选择50例健康人群作式，通常包括切除、化疗和／或放疗等。尽管治疗方式为对照组。观察组均为肝癌初治病患，之后经过手

4、术较多，但是治疗后复发率以及转移率较高]。病理证实为肝癌，所有患者均没有自身免疫性病史，随着分子生物学以及免疫学的不断发展，肿瘤生在研究近三个月内没有经过免疫治疗，且无化疗史。物治疗特别是肿瘤免疫性治疗已经成为肿瘤学研究观察组中男28例，女22例；年龄在18～66岁，平重点，是继切除、化疗以及放疗后肿瘤治疗的第四种均年龄47．3±13．3岁；根据美国癌症分期以及最终治疗方式2。但是实际应用效果不佳，究其原因可能结果报告联合会所提出的肝癌TNM分期标准]，工、是患者体内T细胞所能识别的肿瘤抗原含有较多较Ⅱ期病患26例，Ⅲ、

5、Ⅳ期24例。对照组中男27例，女为正常的自身成分，从某种程度上作为一种自身免23例；年龄在19～67岁，平均年龄47．3±14．2岁。疫，引发机体免疫系统忽视了肿瘤免疫[4-5]。机体的自两组在性别以及年龄上比较无明显差异。身免疫维持稳态是靠人体免疫系统中复杂而又精确二、研究方法的重要调节机制来进行维持的。对外周血CD4、CD25以及调节性细胞进行检近年来大量研究显示，CD4、CD25以及调节性T测。使用不同荧光标记的CD4和CD25单克隆抗体细胞在这种调节机制中起着较为重要作用]。本文标记肝素抗凝的全血标本，使用流式细

6、胞仪(Flow对50例肝癌患者和50例健康人群外周血CD4、CD25cytometry，FCM)对CD4和CD25不同荧光色荧光强以及调节性T细胞进行研究，旨在探讨T细胞在肿瘤度进行检测，最终得到CD4、CD25以及调节性T细胞免疫治疗中的功能和作用机制。在CD4T细胞中所占比例；对CD4和CD25进行常规标记后，将其破膜，用相对应的连接不同荧光素的抗资料和方法体对TFG—l3以及IL一10进行标记，经过流式细胞仪对一、研究对象不同荧光强度进行检测，最终将相应细胞因子在基金项目：国家自然科学基金青年科学基金资助项目(81

7、301239)作者单位：100039北京解放军第三。二医院肝脏2014年12月第19卷第12期·961·CD4、CD25以及调节性细胞内进行表达。体外增殖抑制试验结果CD4CD25Tr能够明显对对外周血CD4、CD25以及调节性细胞进行分cD4cD25T细胞增殖进行抑制，当两种细胞数目相同选。使用Ficoll密度梯度离心法将外周血单核细胞时，两组中两种细胞在比例为1：1时，其抑制率最(PeripheralBloodMononuclearCell，PBMCs)进行分高，且当两组比例相同时，观察组抑制率明显高于对离：将其静置

8、培养2h后，将悬浮细胞使用自动免疫磁照组，差异有统计学意义(P<0．05)。珠分选仪分选出CD4、CD25以及调节性T细胞，将所表1两组外周血CD4CD25Tr占CD4T细胞比例情况比较得细胞使用台盼蓝染色对活细胞数目进行检测，用流(例，±S)式细胞仪对其纯度进行检测。CD4、CD25以及调节性T细胞的培养以及扩增。