甘薯悬浮细胞系的建立及对抗草甘膦基因的遗传转化.pdf

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1、2015年28卷1期西南农业学报V0L28No．1SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences41文章编号：1001—4829(2015)01—0041—04DOI：10．16213／j．enki．+cja~．2015．01．008甘薯悬浮细胞系的建立及对抗草甘膦基因的遗传转化张聪，蒲志刚，张婷，李明，屈会娟，谭文芳，杨松涛，王大一2，阎文昭}(1．imjq省农业科学院生物技术核技术研究所，四川成都610066；2．四川省农业科学院作物研究所，四川成都610066)摘

2、要：选取8个四川主栽甘薯品种为材料，剥离茎尖诱导胚性愈伤组织，建立胚性细胞悬浮培养系。以烟草叶片和川薯20悬浮细胞为受体材料，利用农杆菌浸染方法转化抗除草剂基因EPSPS。结果表明，经PCR检测及草甘膦喷施试验后，获得了抗草甘膦阳性甘薯植株l3株、阳性烟草植株25株，此实验为以EPSPS基因作为遗传转化的标记基因提供了帮助。关键词：甘薯；悬浮细胞；草甘膦；除草剂；遗传转化中图分类号：$531文献标识码：AEstablishmentofCellSuspensionandTransformationofHerbi

3、cideResistantEPSPSGeneZHANGCong。，PUZhi—gang。，ZHANGTing。，L1Ming‘，QuHui~uan，TANWenfang2，YANGSong—tao2，WANGDa—yi，YANWen—zhao‘‘(1．InstituteofBioteehnologyandNuclearTechnology，SichuanChengdu610066，China；2．InstituteofCropSciences，SiehuanAcademyofAcultureSciences，

4、SichuanChengdu610066，China)Abstract：EishtSiehuanSmainvarietiesofsweetpotatoweusedastestedmaterial8．andtheirembryoniccallusinductionandsuspensioncellculturesystembystrippingstemtipwaBestablished．thenohmexpressionvectorscontainingherbicideresistancegeneEPsPsw

5、erein—treducedintotobaccoleavesandchuanshu20suspensioncelbyagrobactefium—mediatedtransformation．TheresultshowedthatbyPCRanal—ysisandherbicidesprayingtest，13positiveswatpotatoplantsand25positivetobaccoplantsofherbicideresistancewereobserved，whichprovidedahel

6、pforherbicideresistanceEPsPsgene鹪aⅡLazk目geneintransformation．Keywords：Sweetpotato；Suspensioncel；Herbicideresistancegene；Transformation甘薯适应性广，高产稳产耐旱耐瘠薄，是我国重除草剂基因则没有类似的潜在危害，并具有产生假要的粮食作物。利用茎尖诱导胚性愈伤组织建立的转化体少和能给作物带来有用农业性状的优点，已甘薯悬浮细胞培养体系分散性好、增殖快、生长迅速较多应用于植物遗传转化中。

7、除草剂草甘膦能竞争再生能力强⋯。由于甘薯茎尖诱导胚性愈伤组织性地抑制5一烯醇式丙酮酸_3一磷酸莽草酸(EPSPS)的难度大，不同基因型的甘薯悬浮细胞再生能力有的活性，使分支酸合成途径受阻，进而扰乱生物体内显著差异J，目前我国西南地区甘薯主产区成功建正常的氮代谢途径而使杂草死亡J，将EPSPS基因立甘薯悬浮细胞系的报道较少，高效的甘薯悬浮细转入植物体内后过量表达EPSPS，在喷施草甘膦时胞再生体系能显著提高甘薯遗传转化效率。即能使植株获得抗性。本研究选取8个主栽川薯品转基因作物目前应用最广泛的标记基因是抗生种，

8、在成功诱导出胚性愈伤组织和建立悬浮细胞培素抗性基因，此类基因容易转移到微生物中使病原养系的基础上，选取悬浮细胞系材料川薯20进行菌获得抗性导致目前临床使用的抗生素失效。而抗EPSPS基因的遗传转化，旨在将其作为筛选标记基因验证抗性功能，为植物表达载体改造及其他目的收稿日期：2014—02—25基因遗传转化筛选工作提供帮助。基金项目：四川省财政创新能力提升工程青年基金项目(2013QNJJ-003)；