甘草过表达HMGR、SQS1、β-AS基因再生植株的诱导.pdf

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1、物技术通讯r⋯NLETTERSINBIOTECHNOLOGYVO1．2513lO．·3jMay,20u1l5393doi：10．3969~．issn．1009—0002．2015．03．021研究报告甘草过表达HMGR、SQS1、／E；S基因再生植株的诱导高雅，刘颖，文浩，王礼强，袁伯川，刘春生北京中医药大学中药学院，北京100102[摘要]目的：诱导过表达3一羟基一3一甲基戊二酰CoA还原酶(HMGR)、鲨烯合成酶1(SQS1)和p一香树脂醇合成酶(-As)基因的甘草再生植株。方法：以植物双元表达载体pCAMBIA1305．1为

2、载体骨架，HMGR、SQS1一As基因为目的基因，利用基因重组试剂盒eFusionCloningKit分别构建含有3个外源基因的重组载体，并将其转入根癌农杆菌EHA105，采用根癌农杆菌介导法将目的基因转入甘草外植体。结果与结论：获得了过表达HMGR、SQS1和卢S基因的甘草愈伤组织及试管苗，为进一步研究这3个功能基因过表达对甘草酸合成的影响奠定了基础。[关键词]甘草；3-羟基一3一甲基戊二酰CoA还原酶；鲨烯合成酶1；B一香树脂醇合成酶；过表达；转基因植株[中图分类号]Q943．2[文献标识码]A[文章编号]1009—0002(

3、2015)03—0393-06InductionofGlycyrrhizauralensisRegeneratedPlantletsOver。_Ex·pressingHMGR，SQS1andl9}一ASGenesGAOYa，LIUYing，WENHao，WANGLi—Qiang,YUANBo—Chuan，LIUChun—Sheng：。：SchoolofChinesePharmacy，BeijingUniversityofCineseMedicine，Beijing100102，ChinaCorrespondingauthor．E—

4、mail：max1iucs@263．net[Abstract]0bjective：ToinduceGlycyrrhizauralensisregeneratedplantsover—expressing3-hydroxy一3一methylgluta—ryl-CoAreductase(HMGR)，squalenesynthetase1(SQS1)andB—amyrinsynthase(卢一AS)genes．Methods：ThepCAMBIA1305．1wasusedtoconstructvectorscarryingexogeno

5、usgenesHMGR，SQS1and卢一AS，usingeFusionCloningKit．RecombinantvectorsweretransferredintodisarmedAgrobacteriumtumefaciensEHA105，andthenintoG．uralensisexplants．respectively．Results&Conclusion：Thecallusandtest—tubeplantletover—expressingHMGR，SQS1and一ASgeneswereobtained．Thisw

6、orkprovidesabasisforfurtherstudiesconcernedwithexplor—ingtheeffectsofoverexpressionofthethreefunctionalgenesonglycyrrhizicacidbiosynthesis．[Keywords]G，c)，rrouralensis；3-hydroxy一3一methylglutaryl—CoAreductase；squalenesynthetase1；3-amyrinsynthase；overexpression；transgeni

7、cplants甘草(GlycyrrhizauralensisFisch．)是我国常用的glutaryl—CoAreductase，HMGR)、鲨烯合成酶1大宗药材之一，有“国老”之美誉，具有清热解毒、补脾(squalenesynthetase1，SQS1)和B一香树脂醇合成酶益气、缓急止痛、祛痰止咳、调和诸药等功效。甘(13一amyrinsynthase，B—AS)是甘草酸生物合成途径草的主要次生代谢产物为甘草酸，具有镇痛、止咳、中的3个关键酶[14-15，与甘草酸的生物合成有着密切抗病毒、抗菌、抗炎、抗肿瘤、保肝等药理活性，且的

8、关系。我们构建了含有甘草HMGR、SQS1和一AS常用作食品、保健品的原料及烟草的添加剂，国内外基因的植物双元表达载体，用根癌农杆菌介导法将市场需求很大。近年来野生甘草资源匮乏，栽培甘其导入甘草外植体，利用诱导培养基、分化培养基及草成为中药材市场上