粗多糖检测方法(蒽酮比色法).doc

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1、粗多糖检测方法（蒽酮比色法）：1主要仪器（1）离心机（4000r/min）。（2）离心瓶容量100ml或具盖10ml离心管。（3）分光光度计。（4）水浴锅。2试剂 实验用水为双蒸水；所用试剂为分析纯级。（1）葡萄糖标准液：准确称取1.0000g经过98～100℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后以水稀释至1000ml，此溶液1ml含1mg葡萄糖，用前稀释10倍（0.1mg/ml），现用现配。（2）0.2%蒽酮硫酸溶液：称取0.2g蒽酮置于烧杯中，缓慢加入100ml浓硫酸（分析纯），溶解后呈黄色透明溶液，现用现配。3测定步骤（1）样品处

2、理：准确称取样品1～2g按上法用乙醇沉淀多糖，然后用热水分次溶解沉淀并稀释定容至100～250ml（使样液含糖量在0.02～0.05mg/ml间）。过滤，弃去初滤液即为待测液。（2）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准液（0.1mg/ml）0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于10ml具塞比色管中，加水至1.0ml，加入蒽酮试剂5ml充分混匀，在沸水浴中加热10min，取出在流水中冷却20min后，在620nm波长下，以试剂空白调零，测定各管的吸收值绘制标准曲线。（3）样品测定：准确吸取样品待测液10ml（含糖20～80

3、μg）按标准曲线绘制步骤于620nm波长下测定吸光度值并求出样品含糖量。4结果计算：  m1X= ———————   ×   F   × n   × 100%    m×1000式中X—样品中粗多糖含量（以葡萄糖计）（%）；m1—由标准曲线查得样品液含糖质量（mg）；m— 样品质量（g）；n—稀释倍数；F—换算因子。换算因子的测定：准确称取被测物质的纯品20mg置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，吸取0.2～0.4ml于10ml具塞比色管中，加水至1.0ml按上法测定。从标准曲线中查出供试液中相当于标准葡萄糖的质量（mg）。

4、 mF= —————        m1 × n式中m—多糖纯品的质量（mg）；m1—多糖纯品供试液中相当于标准葡萄糖的质量（mg）；n—供试液的稀释倍数；