细胞工程 动物组织和细胞培养.doc

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1、第3章动物细胞和组织培养工程第一节植物组织和细胞培养的基础知识一动物细胞培养的基本条件无菌条件：净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器，洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外灯，电热干燥箱，高压灭菌器，抗生素细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，CO2培养箱，培养基，血清细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪，微孔板震荡器，高速离心机，移液器细胞保存条件：液氮罐实验室安全：生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全(一)无菌条件·净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器，洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外灯，电热干燥箱，高压灭菌器，

2、抗生素.1净化工作室------我国药品生产洁净室（区）空气洁净度标准-------洁净度级尘粒最大允许数/立方米尘粒最大允许数别10010,000100,000300,000≥0.5um3,500350,0003,500,00010,500,000≥5um02,00020,00060,000浮游菌/立方5100500NA沉降菌/皿1310152风淋室:●风淋室是生物洁净室的理想配套设备，用于吹除进入洁净厂房的人、物表面附着的尘埃●是进行人身、物料净化和防止室外空气侵入洁净区的有效设备●风淋室可以配合加热器，冬天可以加热，温度可调，

3、一般控制温度在30-35℃较为适宜。3传递窗:该装置是一种洁净室的辅助设备，主要用于洁净区与洁净区，洁净区与非洁净区之间小件物品的传递，以减少洁净室的开门次数，把对洁净区的污染降低到最低程度。4高效过滤器:●高效过滤器是用超细玻璃纤维纸作滤料，胶板纸作分隔板，可与铝合金框、木框及镀锌钢板框组合而成。●特点：具有低阻高效、轻质、容尘量大等特点，●适用于常温常压常湿条件下环境空气的净化.5洁净层流罩:层流罩是可提供局部高洁净环境的空气净化设备。洁净层流罩是将空气经风机以一定的风压通过高效空气过滤器后，使洁净空气呈垂直气流送入工作区，从而保证了工作区

4、内达到工艺所需的高洁净度。6超净工作台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气通过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。7生物安全柜:一种既能使操作造成无菌、无尘的局部空气环境，保证检验、检测不受污染，又能保证被研究的对象（如病菌、细菌等）不外溢，保护周围环境及操作人员的安全隔离设备。该设备可广泛应用于低、中等危险度的临床细菌学，病毒学、微生物学、组织培养、生物学及生命科学的研究，加工、检验部门。·如何除菌？·灭菌8紫外灯：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面

5、消毒。9电热干燥箱：干热消毒（160℃，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒。10蔡氏（Zeiss）滤器：过滤除菌，滤器中的滤膜一般用0.2～0.3μm孔径的微孔滤膜。凡在高温或射线下易发生变性或失去功能的物质，如人工合成培养液、血清、消化用胰酶等都须用滤器过滤除菌。滤器大容量高压灭菌器(二)细胞生长条件·纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，CO2培养箱，培养基，血清1自动双重纯水蒸馏器2纯水仪精滤、活性碳吸附反渗透3标准型细胞培养板（TissueCulturePlates）6孔，12孔，24孔，48孔，96孔4培养瓶5CO2培养箱CO2培养箱主

6、要由箱体结构件、温度控制系统和CO2浓度控制系统三部分组成。CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2。再现活体环境对于温度、PH值CO2浓度、氧分压（O2浓度）、相对湿度等细胞生长关键的因素，6移液器(三)细胞检测条件：·倒置显微镜，酶标仪，微孔板震荡器，高速离心机，移液器15用于微生物、细胞、细菌、组织培养、悬浮体、沉淀物等的观察，并可将此过程中的任一形态拍摄下来。2酶标仪3微孔板震荡器通过自动酶标仪计数来检测活细胞数量。主要用于酶标板、细胞培养板(如6孔板、12孔板、24孔板、48孔、96孔板等)等溶液的混匀或细胞的混匀。(四)细胞

7、保存条件：·液氮罐-196℃(五)实验室安全：·生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全实验室安全层流净化细胞培养室管理规则一级生物安全防护实验室二级生物安全防护实验室三级生物安全防护实验室四级生物安全防护实验室层流净化细胞培养室管理规则局部小环境空气达到洁净度等级层流净化细胞培养室的总体要求：经济、有序、高效、安全。初步制定相关制度如下：实验室安全级别一级生物安全防护实验室实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。二级生物安全防护实验室实验室结构和设施、安全操作规程、

8、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。二级生物安全防护实验室1可能产生致病微生物气溶胶或出现溅出的操作均应在生物安全柜(Ⅱ级生物安全柜为宜