细胞工程 动物组织和细胞培养

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1、三培养细胞的生物学特征洋蔥的表皮細胞哺乳類的肌肉細胞植物輸導水分的細胞人類脊髓神經細胞(一)体外培养细胞的分型1贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞.有机体的绝大多数细胞必须粘附于一固相表面才能生存和生长按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型1)成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。例心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮成纤维细胞2)上皮细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺

2、泡上皮等皆成上皮型形态。上皮型细胞3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。如单核细胞、嗜酸性粒细胞4、多型细胞型：·有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。2悬浮型：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。(二)培养细胞的生长和增殖过程1培养细胞生命期（LifeSpanofCultureCells）所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养

3、中持续增殖和生长的时间。1．原代培养（PrimaryCulture）期：也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。●初代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。细胞相互依存性强。2．传代期：●初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系（CellLine）。●在全生命期中此期的持续时间最长。●在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并能维持二倍体核型，呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系（DiploidCellLine）。●为保持

4、二倍体细胞性质，细胞应在初代培养期或传代后早期冻存。●当前世界上常用细胞均在不出十代内冻存。●一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。3．衰退期：●此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。●在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点（多发生在传代末或衰退期），由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化（SpontaneousTransformation）。●转化的标志之一是细胞可能获得永生性（Immortality）。●细胞永生

5、性也称不死性，即细胞获持久性增殖能力，这样的细胞群体称无限细胞系（InfiniteCellLine），也称连续细胞系（ContinuousCellLine）。●无限细胞系的形成主要发生在第二期末，或第三期初阶段。细胞获不死性后，核型大多变成异倍体（Heteroploid）。●细胞转化亦可用人工方法诱发，转化后的细胞也可能永生性.Transformation1020Primary培养细胞生命期1018CultureFiniteCellLineContinuousCellLine1016原代培养期

6、Subculture101410122ndSubcultureSenescenceandCellDeath1010传代期衰退期SubcultureInterval108SerialPassage106Explanation024681012WeeksinCulture14100CumulativeCellNumber1st2组织培养细胞一代生存期所谓细胞“一代”一词，系仅指从细胞接种到分离再培养时的一段时间，如某一细胞系为第153代细胞，即指该细胞系已传代153次。它与细胞倍增〔Dou

7、bling）不同；在细胞一代中，细胞能倍增3～6次。细胞传一代后，一般要经过以下三个阶段：1．潜伏期（LatentPhase）：●细胞接种培养后，先经过一个在培养液中呈悬浮状态的悬浮期。●此时细胞胞质回缩，接着是细胞附着或贴附于底物表面上，称贴壁，悬浮期结束。●各种细胞贴附速度不同，这与细胞的种类、培养基成分和底物的理化性质等密切相关。●初代培养细胞贴附慢，可长达10～24小时或更多；连续细胞系和恶性细胞系快，10～30分钟即可贴附。●支持物能影响细胞的贴附；底物表面不洁不利贴附，底物表面带有阳性电荷利

8、于贴附。●另外在贴附过程中，有一些特殊物质如纤维连接素（Fibronectin），细胞表面蛋白（CellSurfaceProtein：CSP）等也参与贴附过程。●细胞接种密度大时潜伏期短。细胞贴附2．指数增生期（LogarithmicgrowthPhase）：●这是细胞增值最旺盛的阶段，细胞分裂相增多。●一般以细胞分裂指数（MitoticIndex：MI）表示，即细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。●一般细胞的分裂指数介于0.1%～0.5