Argonaute蛋白结构与功能.doc

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1、RNA干扰以及所有由小RNA分子介导的基因表达沉默机制都有一个共同的特点，那就是会有一个负责沉默作用的小RNA分子（在本文中我们称这个分子为向导链）与Argonaute家族蛋白发生相互作用。这种RNA-Argonaute蛋白复合体就构成了RISC复合体里最基本的，也是最为核心的效应元件。在RISC复合体中，小RNA分子起到这样的作用：通过碱基互补配对原则，以序列特异性的方式引导Argonaute蛋白与靶标分子结合。mRNA的这些靶标分子被Argonaute蛋白识别之后会被切割或者抑制翻译，最终被细胞降解。Argonaute蛋白在进化过程中演变出了各种亚科蛋白。这些

2、亚科蛋白可以识别各种不同类型的小RNA分子，从而在各种小RNA沉默途径中发挥作用。siRNA和miRNA都能与Argonaute亚科蛋白AGO蛋白结合，但是piRNA则与Argonaute亚科蛋白PIWI蛋白结合。在经典的由siRNA分子介导的RNAi途径中，Argonaute蛋白可以用切核酸酶活性来沉默mRNA靶分子，这种过程被称作切割。在生殖细胞中，面对各种外来的遗传物质，Argonaute亚科蛋白PIWI蛋白在piRNA介导的RNA沉默途径中，利用的也是切割机制。在进行切割反应时，目标RNA分子主要在磷酸基团处被切割，该处主要是对应向导链5’端开始第10和第

3、11位碱基处磷酸基团处的位点。只有向导链和靶标链在切割位点处互补情况非常好，切割反应才能发挥作用。Argonaute蛋白也可以不依赖切割反应来达到沉默RNA的目的。在动物细胞的miRNA沉默途径中，Argonaute蛋白可以通过抑制目的mRNA翻译的办法，以及诱导目的mRNA发生脱腺苷化作用（deadenylation）后降解的方法来达到基因沉默的作用。不过，有关miRNA介导基因沉默的精细机制我们现在还不是非常清楚。作为小RNA介导基因沉默途径里的效应分子，Argonaute蛋白必须要能够在与siRNA双链或miRNA-miRNA*双链分子结合时准确识别出小RN

4、A向导链并与之结合，剔除掉没有功能的随从链和miRNA*链，然后依照向导链的指引发现目的RNA（背景知识框1）。在需要RNA切割机制参与的沉默途径中，Argonaute蛋白会被多次循环利用。在Argonaute蛋白循环识别靶标分子，进行切割反应，释放出产物的过程当中，向导链继续与Argonaute蛋白结合，不会脱离。在多细胞动物miRNA的沉默途径里切割机制是通过一种不需要“切割机”的形式（slicer-independentmanner）来发挥作用的，此时的Argonaute蛋白需要一直与靶标mRNA分子紧密结合，这样才能阻止其翻译。1. 功能结构域Argona

5、ute蛋白都是多结构域蛋白，其含有N末端结构域、PAZ结构域、MID结构域和PIWI结构域（图2a）。原核生物Argonaute蛋白的晶体结构表现出一个二叶状（bilobate）结构。MID结构域和PIWI结构域形成其中一叶，而N末端结构域和PAZ结构域形成另一叶（图2b）。Argonaute蛋白家族里的两个标志性的结构域——PAZ结构域和C末端的PIWI结构域最初都是用系统发生序列分析（phylogeneticsequenceanalysis）的方法发现的。对黑腹果蝇Argonaute蛋白中分离出来的PAZ结构域进行三维结构解析的结果表明，PAZ结构域的折叠情况

6、比较类似于低聚糖/低聚核苷酸结合折叠结构域（oligosaccharide/oligonucleotide-binding-folddomain）和Sm折叠结构域（Sm-folddomain）的情况。我们得到的第一个全长Argonaute蛋白的晶体结构是极端嗜热菌（Pyrococcusfuriosus）来源的Argonaute蛋白的晶体结构。该结构显示，曾被LorenzoCerutti等人认定为PIWI结构域的序列基序实际上是由MID结构域和PIWI结构域共同组成的。这两个结构域由被遮盖的Argonaute蛋白C末端中心部位非常保守的位点连接起来（图2b）。MID

7、结构域与lac抑制子里的糖结合结构域比较相似。PIWI结构域的折叠方式则与切割RNA–DNA杂交分子的核糖核酸切酶RNaseH比较类似。古细菌闪烁古生球菌（Archaeoglobusfulgidus）里的PIWI样蛋白Piwi的晶体结构表明该蛋白是由两个结构域组成的，即结构域A和结构域B，分别对应于MID结构域和PIWI结构域。超嗜热菌（A.aeolicus）的全长Argonaute蛋白的PIWI结构域也具有RNaseH样折叠情况。生化研究表明，原核生物的Argonaute蛋白和RNaseH一样，可以起到DNA引导的核糖核酸酶（DNA-guidedribonucl

8、ease）