实验1 柑橘皮化学成分分析.doc

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1、柑橘皮化学成分分析浙江理工大学实验11柑橘皮化学成分分析一、实验目的1．掌握水溶性性和脂溶性成分的提取方法。2．掌握碘量法测定维生素C含量。3．掌握建立HPLC混合物分离的色谱条件，并以外标法测定相关物质的含量。4．掌握建立GC混合物分离的色谱条件，并以外标法测定相关物质的含量。二、实验原理柑橘皮是柑橘果实加工后余留的最大比例副产品，其内含丰富的生理活性成分以及磷、钙、铁、锌等微量元素。中医观点认为：柑橘皮味辛、苦、性温，其功能主要为化痰止咳、理气止痛，可入药。其所含营养成分除氨基酸外，其余均高于果肉，尤其是富含具有一定生理活

2、性成分如维生素C、类黄酮、类胡萝卜素等物质，使柑橘皮及其提取物具有多重生理功效。维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。维生素C有防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。滴定法是维生素C含量测定最主要的方法，滴定法主要有2，6一二氯靛酚滴定法和碘量法，前者更加简便。染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性：一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为无色；二是受其介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定

3、，染料被还原为无色,当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。柑橘皮中的微量金属元素主要有钾、钙、铁、锌等，这些金属离子的含量测定可以原子吸收光谱法测定。待测的柑橘皮的提取液在空气-乙炔火焰中原子化，在光路中分别测定钾、钙、铁、锌等41柑橘皮化学成分分析浙江理工大学对特定波长谱线的吸收。含量计算需要先建立各个金属的标准工作曲线。在测定钙离子时，需要加入镧作释放剂，以消除磷酸等的干扰。黄酮类化合物是一类具有C6一C3一C6结构的酚类化合物的总称，目前已从柑橘中鉴定出来的黄酮

4、类化合物有6O余种，最常见的为橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、柚皮素芸香苷等二氢黄酮类。橙皮苷是目前柑橘属黄酮中最主要的研究对象，橙皮苷（又称陈皮苷或桔皮苷）为二氢黄酮苷类化合物，是橙皮素与葡萄糖和鼠李糖结合形成的苷类。由于橙皮苷和Al(NO3)3溶液在80℃反应15min后能形成黄色络合物，通过波长扫描，可测其420nm有最大吸收，通过橙皮苷对照品的系列溶液得到工作曲线后，进行样品中橙皮苷含量的测定。柑橘皮中含有多种香精油，其中含量最大的4种香精油分别是：柠檬烯，beta-蒎烯，芳樟醇，乙酸芳樟醇。这四种成分沸点不高，受热基本稳定

5、，可用GC进行含量测定。成分结构沸点柠檬烯175~177℃Beta-蒎烯155~156℃芳樟醇193~194℃乙酸芳樟酯219~220℃上述四种成分的标准品可在GC-FID上得到有效分离和检测，可通过外标法对被测溶液中的上述四种成分进行定量计算。41柑橘皮化学成分分析浙江理工大学柑橘皮中含量最大的一种类胡萝卜素是叶黄素，其化学结构如下表所示。这种类胡萝卜素可在HPLC上进行有效的分离，并用对照品通过外标法进行柑橘皮中的含量测定。成分结构叶黄素三、实验步骤3.12%HCl萃取维生素C及以及金属离子：柑橘皮晒干研碎，称量，加2%H

6、Cl成浆状，定容，纱布过滤，抽滤，滤液用白陶土吸附色素后，用于维生素C含量测定以及金属离子的含量测定。3.2维生素C含量测定：抗坏血酸标准溶液(1mg/ml):称取100mg(准确至0.1mg)抗坏血酸,溶于2%HCl中并稀至100ml。现配现用。2,6－二氯靛酚溶液:称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml热蒸馏水中,然后称取2,6－二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中。每次使用前,用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提

7、剂,摇匀,用2,6－二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时,另取10ml浸提剂做空白试验。滴定度T(mg/ml)＝C·V/（V1－V2）式中:T—每毫升2,6－二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数;C—抗坏血酸的浓度,mg/ml;V—─吸取抗坏血酸的体积,ml;V1—滴定抗坏血酸溶液所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml;V2—滴定空白所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml。滴定：吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中,用已标定过的2,6－二氯靛酚溶液滴定,直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时做空白试验。41柑橘皮化学

8、成分分析浙江理工大学计算：C(mg/100g)＝(V－V0)·T·A·100/W式中:V—滴定样液时消耗染料溶液的体积,ml;V0—滴定空白时消耗染料溶液的体积,ml;T—2,6－二氯靛酚染料滴定度,mg/ml;A—稀释倍数;W—样品重量,g。结果评价：用算术平均值表示，取三