食源性致病菌O157-H7的生物检测研究.doc

《食源性致病菌O157-H7的生物检测研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、食源性致病菌O157:H7的生物检测研究　　摘要：根据致病性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的致病基因ｒｆｂＥ设计特异性引物扩增出致病性Ｏ１５７：Ｈ７特异性序列，然后分别用常规的琼脂糖电泳技术和Ａｇｉｌｅｎｔ２１００Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ对ＰＣＲ产物进行检测，并比较两种检测方法的灵敏度、准确度和重复性。结果表明，Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ的灵敏性较琼脂糖凝胶电泳法高；其能准确地确定片段的大小，可提供ＰＣＲ目的片段的质量浓度和摩尔浓度。Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ芯片分析系统结合ＰＣＲ方法可对食源性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７进行特异、准确、稳定、灵敏的检测和鉴定，具有重要的推广价值。　　关键

2、词：大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７；聚合酶链反应；安捷伦２１００生物分析仪；琼脂糖凝胶电泳　　中图分类号：ＴＳ２０７．４；Ｓ８５２．６１＋２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11401－0177-03　　　　DetectionofFoodborneEscherichiacoliO157:H7UsingAgilent2100Bioanalyzer　　　　ＦＥＮＧＪｉａｎ１，ＢＡＩＹａｎ－ｈｏｎｇ１，ＷＡＮＧＹｕｎ－ｌｏｎｇ２，ＪＩＮＧＪｉａｎ－ｚｈｏｕ１　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｆｏｏｄｂｏｒｎｅＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７ｃｏｕｌｄｂｅｄｅｔｅｃ

3、ｔｅｄthroughｂｏｔｈＡｇｉｌｅｎｔ２１００ＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒａｎｄａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｗｈｅｎtheｓｐｅｃｉｆｉｃａｍｐｌｉｆｉｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅａｉｍｇｅｎｅｒｆｂＥｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＰＣＲｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ａｃｃｕｒａｃｙ，ａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ．ＴｈｅBｉｏａｎａｌｙｚｅｒｍｅｔｈｏｄｗａｓａｓ１０ｔｉｍｅｓｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｓｔｈｅａｇｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅ

4、ｓｉｓｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｉｔｃｏｕｌｄprovideｔｈｅａｃｃｕｒａｔｅｓｉｚｅ，ｍａｓｓａｎｄｍｏｌａｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔ．ＴｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＡｇｉｌｅｎｔ２１００ＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒｍｅｔｈｏｄｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｏｏｄｂｏｒｎｅＥ.ｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７；ＰＣＲ；Ａｇｉｌｅｎｔ２１００Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ；ａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　　　　大肠杆菌Ｏ

5、１５７∶Ｈ７是肠出血性大肠杆菌的一个主要血清型，牛、羊、猪等家畜是其主要宿主［１］，人类由于食用被大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７污染的食品或水源而致病。自１９８３年美国Ｒｉｌｅｙ等［２］首次报道大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７可以引起出血性肠炎以来，相继在英国、加拿大、日本等国出现暴发性流行病例。１９８７年我国首次由权太叔等从出血性结肠炎患者粪便中分离到大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７，此后福建、浙江、广东、河北、宁夏等十几个省区陆续分离出该菌［３］。有研究表明，人感染１０个活菌即可致病，导致患者出现剧烈腹痛，引起出血性结肠炎甚至溶血性尿毒综合征［4，５］。　　获得快速、敏感、特异的检测方法对

6、于临床诊断和疫情控制是非常必要的。目前，常见的大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７检验方法主要有常规生化分离鉴定法、免疫磁珠法、酶联免疫吸附法、乳胶凝集试验法、基因探针法、聚合酶链式反应法、微生物鉴定仪法等［６－８］。常规生化方法操作复杂、耗时较长；免疫学方法可对大量样品进行筛选，但容易出现假阳性；而聚合酶链式反应法在病原菌的分子检测中已成为一种常用方法，其中敏感性、特异性和可靠性是衡量ＰＣＲ扩增效率的３个重要指标。本试验使用常规的琼脂糖电泳技术和Ａｇｉｌｅｎｔ２１００Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ芯片分析系统对食源性致病菌Ｏ１５７∶Ｈ７的ＰＣＲ产物进行检测，比较两种检测方法的灵敏度、准

7、确度和重复性，现将结果报告如下。　　１材料与方法　　１．１主要材料与试剂　　大肠杆菌ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ１５７∶Ｈ７菌株８６－２４购于广东省微生物菌种保藏中心。　　针对ｒｆｂＯ１５７序列筛选以下引物序列［９］，ｒｆｂＥＬ：５′－ＧＴＴＡＧＣＧＴＴＡＧＧＴＡＴＡＴＣＧＧ　　ＡＡＧ－３′，ｒｆｂＥＲ：５′－ＣＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＴＡＡＴＡＧ　　ＴＴ－３′，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，目的片段长３７８ｂｐ。７５００ＬａｂＣｈｉｐ试剂盒由ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ提供。　　１．２主要仪器　　Ａｇｉｌｅｎｔ２１００Ｂｉｏａｎａ