新麦草抗除草剂自然变异体的筛选.doc

《新麦草抗除草剂自然变异体的筛选.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、新麦草抗除草剂自然变异体的筛选　　摘要：在细胞和植株两个水平上，筛选野生新麦草抗除草剂草甘膦自然变异体。在适宜的选择压力下，野生新麦草在两个水平上均有一定频率的抗除草剂自然变异体或突变型产生。１００ｍｇ／Ｌ的草甘膦是野生新麦草的抗性愈伤组织适宜的筛选浓度，抗性愈伤组织出现的频率为０．２３％。用高于大田推荐剂量的草甘膦喷施野生新麦草植株，结果出现２×１０－６的抗性个体。　　关键词：野生新麦草；抗除草剂；草甘膦；自然变异体　　中图分类号：Ｑ３１９文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11401－0042-02　　　　ＳｐｏｎｔａｎｅｏｕｓＭｕｔａｔｉｏｎＲｅｓｉｓ

2、ｔａｎｔｔｏＨｅｒｂｉｃｉｄｅｏｆＰｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａＮｅｖｓｋｉ．　　　　ＷＡＮＧＢａｏ－ｄｉ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＳｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｍｕｔａｎｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｈｅｒｂｉｃｉｄｅｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄoncellandplantlevelsｏｆｗｉｌｄＰｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａＮｅｖｓｋｉ．Onproperselectionpressure，ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｍｕｔａｎｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｈｅｒｂｉｃｉｄｅonbothlevelsｏｆｗｉｌｄＰｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａＮ

3、ｅｖｓｋｉ．ｗｅｒｅｅｘｉｓｔｅｄ．Ａｔｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆ１００ｍｇ／Ｌｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ，ｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｒｅｓｉｓｔａｎｔｃａｌｌｉｉｎＰｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａＮｅｖｓｋｉ．ｗａｓ０．２３％ａｎｄ１００ｍｇ／Ｌｗａｓｔｈｅｃｏｍｆｏｒｔａｂｌｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇｄｏｓａｇｅ．２×１０－６ｍｕｔａｎｔｓｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｈｅｒｂｉｃｉｄｅｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｗｈｅｎＰｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａＮｅｖｓｋｉ．ｗａｓｓｐｒａｙｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄｍａｘｉｍｕｍｄｏｓａｇｅ

4、ｓｏｆｈｅｒｂｉｃｉｄｅｓｉｎｆｉｅｌｄ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｗｉｌｄＰｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａＮｅｖｓｋｉ．；ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｈｅｒｂｉｃｉｄｅ；ｇｌｙｐｈｏｓａｔｅ；ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｍｕｔａｔｉｏｎ　　　　通过生物技术手段产生的抗除草剂作物有利于现有除草剂在作物上更加广泛地发挥作用，并成为杂草防治和提高作物产量的重要途径。新麦草［ＰｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａＮｅｖｓｋｉ．］属大麦族，多年生草本植物，顶生穗状花序。多分布于草地、山坡、林下和渠边。其分蘖力强、侵占性强、再生能力强、抗旱、抗寒、耐盐碱，在我国作为牧

5、草种植［１］。新麦草的染色体数目为２ｎ＝１４［2］，是麦类作物的近缘野生种，存在着丰富的优良基因，是麦类作物改良的优良基因源，已经被作为野生种质资源收集、保存并开发利用［3-5］。为了进一步挖掘新麦草这一野生种的优异基因资源，本研究通过细胞和植株两水平进行了抗除草剂自然变异体的筛选，旨在获得抗除草剂的自然变异体，以期为小麦抗除草剂育种提供优异种质资源。　　１材料与方法　　１．１供试材料　　植物材料：野生新麦草［WildＰｓａｔｈｙｒｏｓｔａｃｈｙｓｊｕｎｃｅａＮｅｖｓｋｉ．］。除草剂：草甘膦１０％水剂，市售。该除草剂为高效、低毒、杀草谱广，是生产上普遍推广应

6、用的化学除草剂。　　１．２愈伤组织诱导和悬浮细胞系的建立　　取以上野生新麦草的成熟种子，于０．１％升汞中消毒８ｍｉｎ，无菌水冲洗３次，挖取胚的部分放于附加５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＨＢＷ培养基上诱导愈伤组织，两周后转至附加２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＨＢＷ培养基上继续培养４周，然后在附加２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上继代培养，每４周继代１次［６］。选取继代过程中色泽鲜艳、质地脆嫩、结构松散、生长旺盛的愈伤组织置于液体ＭＳ２培养基中进行悬浮培养，每周用同样的培养基继代两次。当组织块变得细而均匀时，即用于筛选。　　１．３抗除草剂自然变异体的筛选及其频率的确定　　将细胞

7、系先放在ＭＳ２附加不同浓度除草剂的液体培养基中悬浮培养两周，再转至对应除草剂浓度的ＭＳ２固体培养基上筛选，８周后调查结果。抗性突变频率以抗性愈伤组织的块数占总愈伤组织块数的百分率计数。　　１．４抗性愈伤组织遗传稳定性鉴定　　以抗草甘膦的变异体为材料，将筛选获得的抗不同浓度除草剂的抗性愈伤组织依次转至选择压力为零的ＭＳ２固体培养基上培养８周，取部分培养物在液体ＭＳ２培养基中悬浮培养４周。然后将其与作为对照的未经过除草剂筛选的悬浮细胞系同时放在ＭＳ２附加与初次筛选时除草剂浓度相同的固体培养基上进行培养，以便确定所获得抗性愈伤组织的真实性。　　１．５突变体植株水平

8、筛选　　将新麦草播种于３３３．５ｍ２的小区内，待其出