答案 DNA的粗提取与鉴定.doc

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1、DNA的粗提取与鉴定学习目标：学会DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质记住DNA的粗提取和鉴定的原理实验原理：DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。重点与难点：DNA的粗提

2、取与鉴定的原理实验仪器与设备：1.铁架台2.玻璃棒(1个)3.滤纸4.量筒（100ml，1个）5.烧杯(100ml1个,50ml和1000ml各2个)6.试管（20ml，2个）7.漏斗(1个)8.试管夹(2个)9.纱布(15块)10.离心机(1台)实验材料：1.鸡血细胞液（5ml~10ml）2.95%乙醇（预冷24h）3.蒸馏水4.柠檬酸钠(质量浓度0.1g/ml)5.氯化钠(2mol/L和0.015mol/L)6.二苯胺实验步骤：实验前需要制备鸡血溶液，制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为0.1g/ml的溶液

3、（抗凝剂）100ml，置于500ml烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180ml）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用1000rpm离心2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液（如果没有离心机，可以将烧杯中的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀）。1．提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5ml~10ml，注入到50ml烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20ml，同时用玻璃棒充分搅拌5min，

4、使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000ml的烧杯中，取其滤液。2．溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为2mol/L的溶液40ml加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA溶液中呈溶解状态。3．析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量的浓度相当于0.14mol/L）。4．滤取含DNA的

5、粘稠物用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至1000ml的烧杯中，含DNA的粘稠物被留在纱布上。5．将DNA的粘稠物再溶解取1个50ml烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为2mol/L的溶液20ml。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃棒不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。6．过滤含有DNA的氯化钠溶液取1个100ml烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。7．提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为95%的溶液50m

6、l（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含有杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA。注意观察丝状物是什么颜色(白色)。8．DNA的鉴定取两支20ml的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0.015mol/L的溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。【典例解析】本

7、实验中有三次过滤：⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液⑶过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液以上三次过滤分别为了获得（）A含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液B含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液C含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的DNAD含较纯的DNA滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液跟踪训练1．下列图示中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度之间关系的是（）2．在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核物质和析出含DNA

8、的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水，其作用在于（）A．前者用来溶解血细胞，后者用来溶解DNAB．前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释NaCl溶液C．前者用来分离细胞核与细胞质，后者用来提取DNAD．前者使DNA从核中分离出来，后者使DNA析出3．在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取含杂质较少的DNA时必须用（）A．0.14mol/L的NaCl溶液B．玻璃棒充分搅拌直至丝状物溶解C．经充分预