亚麻下胚轴对卡那霉素及膦化麦黄酮的敏感浓度筛选.doc

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1、亚麻下胚轴对卡那霉素及膦化麦黄酮的敏感浓度筛选　　摘要：在亚麻高效再生体系建立的基础上，以亚麻栽培品种派克斯、中亚２号和华星００９为材料，研究了不同浓度的卡那霉素和膦化麦黄酮对亚麻下胚轴分化和生长的影响。结果表明，在亚麻遗传转化早期选择时，５０ｍｇ／Ｌ的Ｋａｎ或１．５ｍｇ／Ｌ的ＰＰＴ能够完全抑制亚麻下胚轴的分化，是适宜的筛选浓度。　　关键词：亚麻；组织培养；遗传转化；卡那霉素；膦化麦黄酮　　中图分类号：Ｓ５６３．２；Ｓ５０３．５３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11416－3412-04　　　　ＳｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＳｕｓｃｅｐｔｉｖｅＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＫａｎａｍｙｃｉｎａｎｄ

2、Ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎ　　ｉｎＬｉｎｕｍｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍL.Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ　　　　ＪＩＡＷａｎ－ｑｉ，ＨＡＯＤｏｎｇ－ｍｅｉ，ＱＩＵＣａｉ－ｓｈｅｎｇ，ＧＵＯＹｕａｎ，ＤＥＮＧＸｉｎ，ＬＯＮＧＳｏｎｇ－ｈｕａ，　　ＣＨＥＮＸｉｎ－ｂｏ，ＷＡＮＧＹｕ－ｆｕ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＫａｎａｍｙｃｉｎａｎｄpｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎｏｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｇｒｏｗｔｈｏｆＬｉｎｕｍｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍＬ．ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｕｓｉｎｇＬ．ｕｓ

3、ｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍｃｕｌｔｉｖａｒｓＬ．ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍｃｖ．Ｐａｘ，Ｌ．ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍｃｖ．ＺｈｏｎｇｙａＮｏ．２ａｎｄＬ．ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍｃｖ．Ｈｕａｘｉｎｇ００９ａｓｍａｔｅｒｉａｌｓｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｅｆｆｉｃｉｅｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ５０ｍｇ／ＬＫａｎｏｒ１．５ｍｇ／ＬＰＰＴｃｏｕｌｄｔｏｔａｌｌｙｉｎｈｉｂｉｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＬ．ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍｈｙｐｏｃｏｙｌｉｎｅａｒｌｙｓｅｌｅｃｔｉｏｎ．Ｉｔｗａｓｔｈｅａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．

4、　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＬｉｎｕｍｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍＬ．；ｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ；ｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ；Ｋａｎａｍｙｃｉｎ；pｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎ　　　　亚麻是亚麻科亚麻属一年生草本植物，也是农业上古老的韧皮纤维作物和油料作物。早在５０００多年前古埃及就已经开始种植亚麻，并用其纤维织布，现代从古墓中出土的木乃伊就是用亚麻布包裹的。亚麻纤维具有拉力强、细度好、柔软、导电弱、吸水散水快、膨胀率大等特点，可纺高支纱，是制作高档服装的高级衣料，亚麻纺织品以其独特的品质深受广大消费者的青睐。但亚麻种子作为保健食品及医药原料的深度开发才刚刚开始，我国亚麻纤维又严重

5、短缺，因此发展亚麻产业具有广阔的前景。　　随着分子生物学技术和基因工程的不断发展，转基因技术逐渐成为培育亚麻优良品种的新途径。近年来，亚麻的遗传转化取得了一定的进展［１－９］，如何从转化群体中快速、有效地筛选出含有外源目的基因的转化体是成功获得转基因植株的关键。目前，应用于亚麻的转化体筛选方法包括抗生素筛选、除草剂筛选［１０，１１］、甘露糖筛选［１２］和β－葡萄糖苷酸酶染色反应筛选等数种，其中以抗生素筛选和除草剂筛选应用最多。不同植物、不同外植体对筛选剂的敏感性不同，探讨亚麻体细胞对筛选剂的最适筛选浓度对亚麻的遗传转化具有重要的意义。试验采用３个亚麻品种的下胚轴作为材料，研究其对卡那霉素和除草

6、剂的有效成分膦化麦黄酮的敏感性，以期为亚麻遗传转化提供理论依据和试验指导。　　１材料与方法　　１．１材料　　１．１．１亚麻外植体的获得供试亚麻品种为派克斯、中亚２号、华星００９。选择饱满度好、有光泽的亚麻种子，分别用７５％的乙醇浸泡３ｍｉｎ，再用０．１％的升汞溶液浸泡４ｍｉｎ，去离子水冲洗４遍，无菌滤纸稍微吸干后接种于ＭＳ培养基上。２５℃±２℃条件下，先暗培养５ｄ，再转为每天１６ｈ光照继续培养３ｄ。将萌发后的亚麻下胚轴部分切成０．５～０．８ｃｍ长的小段，作为后续试验的外植体。　　１．１．２筛选剂硫酸卡那霉素购自北京鼎国生物有限公司；除草剂有效成分物膦化麦黄酮由捷克科学院植物分子生物学研究所惠赠

7、。　　１．１．３培养基①种子萌发培养基为ＭＳ；②出愈和分化培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０２ｍｇ／Ｌ。以上培养基均添加３０ｇ／Ｌ的蔗糖和７ｇ／Ｌ的琼脂，调节ｐＨ＝５．８，常规方法灭菌。　　１．１．４试验方法先将准备好的下胚轴切段置于无筛选剂的培养基②上进行２ｄ的恢复培养。再分别把所需质量浓度的卡那霉素和膦化麦黄酮溶液经０．２２μｍ孔径过滤器除菌后加入到灭好菌的培养基②中。卡那霉素设５