结核病实验室涂片镜检技术

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1、结核病实验室涂片镜检技术王甦民北京结核病控制研究所2010年12月结核病基本情况：（1）结核病是一个古老的疾病，至今仍然严重威胁着人类健康。近十几年来，由于结核菌的耐药性、HIV/TB双重感染移民（流动人口）问题使全球结核病控制工作面临严重挑战。全球结核病告急据世界卫生组织估计目前全球约有：1/3人口（20亿）感染结核菌；2000万结核病人；每年有800万-1000万新发病例；每年300万人死于结核病；我国结核病现状我国的结核病疫情依然十分严重，是世界上结核病患病率最高的22个国家之一。是耐药结核病最多的全球27个国家之一。每年新登记的结核病患者约130万。我国结核病现状2000年全

2、国结核病流行病学抽样调查初步结果显示：全国受结核菌感染人口超过5.6亿；全国现有传染性肺结核病人200万，传染性肺结核患病率为157.8/10万。结核病死亡率为9.8/10万，在各种死亡原因中占第11位。结核菌耐药率：27.8%，初始耐药率18.6%，获得性耐药率：46.5%。INH:17.6%，SM：17.3%，RFP：16.6%，EMB：1.5%，MDR：10.7%。非结核分枝杆菌感染：11%我国结核病现状—我国历次流调疫情结核病细菌学检查的重要作用是结核病临床诊断和治疗的重要依据是直接发现病原菌的诊断方法，比影象学、免疫学等检查具有更高的特异性是确定、调整化疗方案的重要依据是国

3、家结核病控制规划（NTP）的重要组成部分是发现传染源的最主要途径和手段是考核疗效、评价防治效果的可靠指标分枝杆菌生物学基础概述结核分枝杆菌是1882年郭霍（RobertKoch）从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核病的主要病原菌。分类结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、分枝杆菌科的分枝杆菌属，分枝杆菌属种类甚多，目前已命名的有200多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。概述分枝杆菌呈分支状生长，营养要求比普通细菌高，是一种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。经石炭酸复红染液着色后，不被盐酸酒精脱色，故称此类细菌为抗酸菌。分枝杆菌分类结核分枝杆菌结构结核分枝杆菌组成：细胞

4、壁、细胞膜、细胞质、核物质细胞壁厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚。含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。功能：保护细菌的固有形态抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏和杀伤如果细胞壁有缺陷，细菌只能在高渗环境下生存，则称此类细菌为L型细菌。细胞膜细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的半透膜。主要成分是脂类（磷脂）和蛋白质。功能：细菌与外界环境进行物质交换在细胞内一系列代谢活动中起重要作用菌体成分脂类多糖蛋白质核酸盐类脂类（1）结核菌体脂类含量比其他细菌高，占细胞壁干重的60％，是引起结核病特征性变化与表现的物质基础。脂质含量与细菌毒力相关，毒力强的Mtb含脂最高。脂质只要有磷脂、脂肪

5、酸、蜡质等成分，多与蛋白质、多糖以结合形式存在。脂类（2）磷脂：刺激机体单核细胞增生，增强菌体成分诱导机体致敏作用。索状因子：与Mtb毒力密切相关。硫脂蜡质：占脂质总量48％，分A、B、C、D。结核菌酸：促进机体形成结核结节。分支菌酸：为结核菌菌体的重要成分，与结核菌的抗酸性有关。多糖由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖等组成。多以脂类、蛋白质和核酸等结合形式存在。是免疫反应的重要抗原物质。蛋白质Mtb含多种蛋白质组分，由不同菌体蛋白及活菌在分泌过程中分泌于细胞外的多种蛋白组成。结核菌的主要抗原性物质。结核菌素、PPD为多种蛋白的复合抗原，可刺激机体免疫应答。核酸RNA

6、含量比DNA高4－5倍。RNA分布于细胞质内，DNA存在于细胞核物质中。DNA是遗传物质，将遗传信息传给子代，并指导RNA的合成。RNA是蛋白质和其他细胞成分合成必须的物质。结核分枝杆菌基因组结核分枝杆菌DNA中约含4000个基因组。结核分枝杆菌为2.5×109道尔顿,卡介苗株为2.8×109道尔顿结核分枝杆菌H37Rv基因组全序列共含4.4×106碱基对，平均鸟嘌呤+胞嘧啶含量（G＋C）为65.6％。盐类钙、钾、镁、铁、磷等，约占菌体成分的6％。营养与发育结核菌是需氧菌，但在含有比较低氧的环境下也能生存，比如骨结核，淋巴结核。在少量二氧化碳的环境中生长的也很好。结核菌生长的适宜温度

7、和人体相近为370C结核菌生长所必需的元素有氧、碳、氮、氢、磷、钾、镁等。结核分枝杆菌形态结核菌是兼性需氧菌，无鞭毛、荚膜，无运动能力；形状：0.3-0.6×1-4微米的细长杆状，直或稍弯，镜下常堆积成团、成束、排列杂乱无章，也有呈串珠样、链状、索状者。革兰氏染色阳性，萋-尼氏染色镜下的抗酸杆菌为淡兰色背景下的红色或粉红色细长杆菌。荧光染色镜下的抗酸杆菌在暗色背景下呈黄绿色或橙色荧光。抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高，并