变应性鼻炎患者鼻黏膜SEB和TIM4的表达及其相关性研究.pdf

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1、广东医学2015年3月第36卷第5期GuangdongMedicalJournalMar．2015．Vo1．36．No．5·7】7·变应性鼻炎患者鼻黏膜SEB和TIM4的表达及其相关性研究术周才杰，赵梅珍，邱书奇，杨平常，胡田勇，高晗广东省深圳市龙岗中心医院耳鼻咽喉科医院、深圳市耳鼻咽喉研究所(518172)；加拿大麦克马斯特大学病理与分子医学系【摘要】目的观察葡萄球菌肠毒素B(SEB)和T细胞免疫球蛋白粘蛋白4(TIM4)在变应性鼻炎患者鼻黏膜中的表达，并探讨其相关性。方法收集24例过敏性鼻炎(AR)患者和22例非AR患者手术切除的鼻黏膜标本。从手术切除的鼻黏膜中分离单核细胞并进行流式分析。

2、采用ELISA、qRT—PCR和Westernblot检测AR患者鼻黏膜中SEB和TIM4水平。结果在AR患者的鼻黏膜中检测到了大量的B细胞，同时表达高水平的TIM4和共刺激分子。在AR鼻黏膜检测到高水平的SEB。加SEB培养时，SEB能介导鼻黏膜B细胞TIM4的表达。SEB水平和TIM4B细胞频率呈正相关(r=0．596，P<0．05)。结论AR鼻黏膜中SEB和TIM4表达升高；接触SEB能介导幼稚B细胞表达TIM4和共刺激分子。TIM4CD19B细胞可能成为治疗AR的潜在靶点。【关键词】过敏；鼻黏膜；鼻炎；金黄色葡萄球菌肠毒素B；T细胞免疫球蛋白粘蛋白4变应性鼻炎(allergicrhin

3、itis，AR)是IgE介导的I在手术前至少2周未使用任何抗原药物。非AR组患型变态反应，以发作性鼻痒、阵发性喷嚏、大量清水样者包括患有慢性鼻甲肥大伴或不伴鼻窦炎，但无AR鼻涕和鼻塞为主要特征⋯。据统计其全球性的发病率症状(所有阴性对照组皮肤抗原试验阴性，检测不到血约为25％～35％，部分地区可高达44．2％；我国的清抗原特异性IgE／IgG1、鼻黏膜提取物主要基本蛋白发病率高达11％。近年来AR发病率呈现持续上升MBP和类胰蛋白酶)。所有患者都部分伴有下鼻甲肥趋势，严重影响患者的生活质量，已经成为影响人类健大病史。康的全球性问题。一系列研究已经证实葡萄球菌肠毒表1患者一般资料±5素B(sta

4、phylococcalenterotoxinB，SEB)与气道变态反应有关，位于上皮下层的树突细胞能经Toll样受体识别SEB。SEB作用后的树突细胞能产生T细胞免疫球蛋白粘蛋白域分子4(Tcellimmunoglobulinmucindomainmolecule，TIM4)⋯，而后者与原始CD4T细胞上的TIM1结合，促使它们向Th2细胞分化”。由于未成熟B细胞有类似的抗原提呈作用，我们假定SEB能够介导B细胞产生TIM4；然后驱使幼稚T细胞变成Th2细胞，进一步介导偏Th2细胞极化。在此研究中，我们在鼻过敏患者鼻黏膜中观察到大量CD19B细胞和高水平的SEB。接触SEB能介导幼稚B细胞表达

5、TIM4和共刺激分子。1资料与方法1．1一般资料本研究选取患有下鼻甲肥大伴随或不伴随过敏性鼻炎的患者。AR的诊断标准参照文献报道。所有患者都有长期鼻塞症状，各种疗法均未表2患者皮肤抗原检测结果例(％)取得满意的效果而要求手术治疗，无手术史。患者一过敏原阳性过敏原阳性般资料见表1。皮肤抗原检测结果见表2。所有患者尘螨24(100．0)草花粉12(50．0)猫毛屑8(33．3)豚草9(37．5)广东省医学科研基金立项项目(编号：A2013610)，广东省深圳狗毛屑6(25．0)蟑螂8(33．3)市卫生计生系统科研立项项目(编号：201401097)，广东省深圳市龙岗区科技计划医疗卫生项目(编号：Y

6、S2013059)1．2试剂SEB、TIM1和TIM4抗体(SantaCruz，△通信作者。胡田勇：E—mail：guyue54guyue@163．com；高晗：E—CA)，CD19、CD38、CD80和CD86荧光标记抗体(BD，mail：haohan1992@163．corn上海)。RNA提取试剂盒，cDNA合成试剂盒，PCR试广东医学2015年3月第36卷第5期GuangdongMedicalJourn~Mar．2015，Vo1．36，No．5剂盒(凯捷，上海)。SEBELISA试剂盒(R&D，上海)，因的目标值归一化处理。TIM4的引物为：正义：5r_免疫细胞分离试剂盒(Auburn，

7、CA)。鲎试验检测内毒GAAACTGTCCTCCCCAGTGA一3；反义：5一CCAG—素(LimulusamebocytelysateQCL1000。BioWhittaker，GCTGAGGAGAAGACAC一3(NCBI：NM一138379；startWalkersville，MD，USA)。试剂盒含量<0．2U内毒素／code：742；endcode：899；size：158bp)。10g。