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时间：2020-05-08
《上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在高侵袭性肝细胞癌中的表达-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·短篇论著·上皮钙黏蛋白(E-cadherin)在高侵袭性肝细胞癌中的表达吕俊旭【摘要】目的探讨上皮性钙黏蛋白(E—Cadherin)在人肝细胞癌(HCC)中的表达及其与肝癌侵袭、转移性的关系。方法选择原发性肝细胞癌及癌旁组织25例E—cadhefinmRNA的表达，采用半定量逆转录PCR(RT—PCR)检测。结果E—cadhenn在25例肝细胞癌及相应的癌旁组织中基因表达值为(82．9％±54．9％)和(49．5％±26．9％)，两者差异有统计学意义(P2、4％±16．0％)。高侵袭性肝癌和低侵袭性肝癌E—cadhefin表达指数分别为(48．9％±38．0％)和(79．1％±19．1％)，两者差异无统计学意义OP>0．05)。E—cadhefin表达指数与肿瘤包膜和大小无关。结论肝癌患者的肝细胞癌组织E—cadhefin表达，低于其相应的癌旁组织，高侵袭性肝癌较低侵袭性肝癌的表达更低，肝癌获得高侵袭转移能力的因素之一是E—cadherin的丧失或低表达。【关键词】细胞黏附分子；癌；肝细胞；钙粘着糖蛋白类；肿瘤侵润肝细胞性肝癌是世界范围内高死亡率恶性肿瘤之一，dNTP3、2斗L(10mmol／L)，OligdT2斗L(100斗g／mL)，对其侵袭转移机制的研究一直是国内外的研究热点。恶性RNase0．5斗L(40U／VLL)，5×AMV缓冲液Pro—mega)4斗L，肿瘤侵袭转移是由一系列基因参与调控的多步骤的复杂过AMV(Promega)10uooU／斗L)。加无RNase水至总体积程，涉及到肿瘤细胞的黏附、基质的降解、肿瘤细胞的迁移、20斗L。42℃水浴60min，95℃5min。一20℃保存。肿瘤血管生成等多个环节。其中细胞黏附是一个重要环节川。4．PCR：100斗L反应体积4、，10斗LcDNA，15pmol上皮型钙黏蛋自在肿瘤侵袭转移中的作用受到较多关注，引物，10仙L10×PCR缓冲液及2UTaqDNA多聚酶而与肝细胞癌侵袭转移等生物学特征的关系报道不多。我(Promega)。95oC变性5min，每次循环95℃变性1min，们采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)研究肝癌手57℃(E—cadherin)复性1min，720C延伸。确定扩增的线性术标本中E—cadherin基因表达。以B—actin基因为内标，范围，选定30次循环。进行相同条件的PCR扩增，光密度扫描仪测定PC5、R产物5．PVR产物的酶切鉴定：E—cadherin扩增产物经酚抽相对量作比较。现报告如下。提后，0-3mol／LNaAc和2倍体积无水乙醇沉淀，20斗L双蒸水溶解，取10¨L于20斗L反应体积中，用AVaII和资料与方法BacI(Promega)于376C水浴中反应2h，2％琼脂糖电泳鉴定。一、一般资料6．PCR结果的半定量分析：用ShimadzuC一9000光液氮保存的肝癌手术切除标本25例，均经病理证实为密度扫描仪扫描上述摄影照片，每例癌和癌旁组织基因肝细胞癌(HCC)。男23例，女2例。年龄30～70岁，平6、均表达值以(E—cadhefin／B—actin)×100％表示，每例患者年龄48．7岁。甲胎蛋白(AFP)阳性15例(>20n咖L)，阴性E—cadherin表达指数以与癌旁E—cadhefin的基因表达值之10例。全部病例均有乙型肝炎病毒(HBⅥ感染史。比×100％表示。二、方法结果1．RNA抽提、定量和鉴定：采用异硫氰酸胍提取总RNA，溶于20～50斗L经DEPC处理的双蒸水中，Shimadzu1．肝细胞癌及相应癌旁组织E-eadherin的表达：UV一3000型紫外分光光度计测定吸光度(A)260／280，7、计算E—cadherin在25例HCC相对应的癌旁组织中均有表达，基RNA浓度，琼脂糖甲醛变性电泳鉴定RNA完整性。因表达值为(82．9％±54．9％)，而25例癌组织中的表达有不2．引物：E—cadherin：有义链：5。ACCTCTGTGATGGAGG—同程度的减少或丧失，其基因表达值为(49．5％-I-26．9％1，TC3’，反义链：5’GGGGGCTTCGTTCACGTC3’。13一actin：两者差异有统计学意义(P<0．05)。而低转移模型CLCID25)的有义链：5’CTACAATGAGCTGCGTG8、TGGC3。，反义链：表达值为(67．4％±16．0％)。5’CAGGTCCAGACGCAGGATGGC3’。2．E—cadherin表达与肝癌侵袭性的关系：高侵袭性肝3．cDNA合成：20斗L反应体积，包括3斗g总RNA，癌10例(发生肝内转移)，低侵袭性肝癌15例(未发生肝内转移)，E—cadherin表达指分别为(48．9％-I-38．O％1和DOhl
2、4％±16．0％)。高侵袭性肝癌和低侵袭性肝癌E—cadhefin表达指数分别为(48．9％±38．0％)和(79．1％±19．1％)，两者差异无统计学意义OP>0．05)。E—cadhefin表达指数与肿瘤包膜和大小无关。结论肝癌患者的肝细胞癌组织E—cadhefin表达，低于其相应的癌旁组织，高侵袭性肝癌较低侵袭性肝癌的表达更低，肝癌获得高侵袭转移能力的因素之一是E—cadherin的丧失或低表达。【关键词】细胞黏附分子；癌；肝细胞；钙粘着糖蛋白类；肿瘤侵润肝细胞性肝癌是世界范围内高死亡率恶性肿瘤之一，dNTP
3、2斗L(10mmol／L)，OligdT2斗L(100斗g／mL)，对其侵袭转移机制的研究一直是国内外的研究热点。恶性RNase0．5斗L(40U／VLL)，5×AMV缓冲液Pro—mega)4斗L，肿瘤侵袭转移是由一系列基因参与调控的多步骤的复杂过AMV(Promega)10uooU／斗L)。加无RNase水至总体积程，涉及到肿瘤细胞的黏附、基质的降解、肿瘤细胞的迁移、20斗L。42℃水浴60min，95℃5min。一20℃保存。肿瘤血管生成等多个环节。其中细胞黏附是一个重要环节川。4．PCR：100斗L反应体积
4、，10斗LcDNA，15pmol上皮型钙黏蛋自在肿瘤侵袭转移中的作用受到较多关注，引物，10仙L10×PCR缓冲液及2UTaqDNA多聚酶而与肝细胞癌侵袭转移等生物学特征的关系报道不多。我(Promega)。95oC变性5min，每次循环95℃变性1min，们采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)研究肝癌手57℃(E—cadherin)复性1min，720C延伸。确定扩增的线性术标本中E—cadherin基因表达。以B—actin基因为内标，范围，选定30次循环。进行相同条件的PCR扩增，光密度扫描仪测定PC
5、R产物5．PVR产物的酶切鉴定：E—cadherin扩增产物经酚抽相对量作比较。现报告如下。提后，0-3mol／LNaAc和2倍体积无水乙醇沉淀，20斗L双蒸水溶解，取10¨L于20斗L反应体积中，用AVaII和资料与方法BacI(Promega)于376C水浴中反应2h，2％琼脂糖电泳鉴定。一、一般资料6．PCR结果的半定量分析：用ShimadzuC一9000光液氮保存的肝癌手术切除标本25例，均经病理证实为密度扫描仪扫描上述摄影照片，每例癌和癌旁组织基因肝细胞癌(HCC)。男23例，女2例。年龄30～70岁，平
6、均表达值以(E—cadhefin／B—actin)×100％表示，每例患者年龄48．7岁。甲胎蛋白(AFP)阳性15例(>20n咖L)，阴性E—cadherin表达指数以与癌旁E—cadhefin的基因表达值之10例。全部病例均有乙型肝炎病毒(HBⅥ感染史。比×100％表示。二、方法结果1．RNA抽提、定量和鉴定：采用异硫氰酸胍提取总RNA，溶于20～50斗L经DEPC处理的双蒸水中，Shimadzu1．肝细胞癌及相应癌旁组织E-eadherin的表达：UV一3000型紫外分光光度计测定吸光度(A)260／280，
7、计算E—cadherin在25例HCC相对应的癌旁组织中均有表达，基RNA浓度，琼脂糖甲醛变性电泳鉴定RNA完整性。因表达值为(82．9％±54．9％)，而25例癌组织中的表达有不2．引物：E—cadherin：有义链：5。ACCTCTGTGATGGAGG—同程度的减少或丧失，其基因表达值为(49．5％-I-26．9％1，TC3’，反义链：5’GGGGGCTTCGTTCACGTC3’。13一actin：两者差异有统计学意义(P<0．05)。而低转移模型CLCID25)的有义链：5’CTACAATGAGCTGCGTG
8、TGGC3。，反义链：表达值为(67．4％±16．0％)。5’CAGGTCCAGACGCAGGATGGC3’。2．E—cadherin表达与肝癌侵袭性的关系：高侵袭性肝3．cDNA合成：20斗L反应体积，包括3斗g总RNA，癌10例(发生肝内转移)，低侵袭性肝癌15例(未发生肝内转移)，E—cadherin表达指分别为(48．9％-I-38．O％1和DOhl
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