G1764A突变与肝细胞癌的相关性-论文.pdf

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1、宁夏医科大学学报第36卷2期·148·JournalofNingxiaMedicalUniversity2014年2月文章编号：1674—6309{2014)02—0148—03·论著·宁夏地区乙型肝炎病毒基因BCP区A1762T／G1764A突变与肝细胞癌的相关性闪明海，胡爱丽，杨琴，何芳，胡建国，杨少奇(1．宁夏医科大学总医院消化内科，银川750004；2．宁夏人民医院，银川750021)摘要：目的通过分析宁夏地区HBV基因核心启动子A1762T／G1764A双基因突变的特征，探讨其与乙型肝炎相关原发性肝癌的相关性。方法收集宁夏地区1

2、04例慢性乙肝患者和88例乙肝相关肝细胞癌患者的一般病例资料及血清，采用荧光定量PCR法检测两组患者HBVDNA定量值；采用巢式PCR扩增及测序方法检测HBVC启动子A1762T／G1764A(ntA1762A-~T和nt1764G—A)双突变情况；采用多因素Logistic回归分析肝细胞癌发生的危险因素。结果104例慢性乙肝组和88例肝细胞癌组对比发现年龄、e抗原阴性、HBVDNA水平、乙肝肝硬化、HBVA1762／G1764A双位点突变均可能与肝细胞癌的发生有关，多因素Logistic回归分析结果提示年龄>50岁、e抗原阴性、乙肝肝硬

3、化、HBVA1762T／G1764A双突变与肝细胞癌发生呈正相关，而与HBVDNA>10拷贝／mL呈负相关(P：0．000，OR=0．257)O结论宁夏地区乙肝病毒基因BCP区A1762T／G1764A基因双突变是肝细胞癌发生的危险因素。关键词：乙型肝炎病毒；C启动子；变异；肝细胞癌中图分类号：R735．7文献标识码：A肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是的同心县人民医院、海原县人民医院的宁夏籍住．世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，发病率居恶院乙肝相关性肝病患者192例，其中男159例、女性肿瘤的第6位，病死

4、率居癌症死亡病因的第三33例，年龄(49．24±10．2)岁。依据疾病诊断将位。在我国，乙型肝炎病毒(HBV)与肝癌高发密患者分为CHB组104例、HCC组88例。CHB的切相关，HBsAg阳性者发生HCC的风险性较HB—诊断参照2000年第六届(西安)全国传染病与寄sAg阴性者约高100倍J。HBV由于受到宿主免生虫病学术会议通过的《病毒性肝炎的诊断标疫以及药物等作用后常发生位点的突变，突变可准》J。HCC的诊断均符合2001年第八届(广造成HBV免疫逃逸的发生及致病性的改变。研州)全国肝癌学术会议通过的《原发性肝癌的临究报道HBVBC

5、P区A1762／G1764A双位点突变床诊断与分期标准》J。与HCC的发生有显著相关性，认为A1762／1．2方法G1764A双位点突变与HCC的发生密切相1．2．1外周血清HBVDNA含量的测定收集关]。本实验采用巢式PCR技术及测序的方患者血清，一70℃冻存至检。采用荧光定量PCR法对88例HBV相关肝细胞癌(HCC)患者和104法(VQ—PCR)检测患者血清HBV—DNA含量，例慢性乙肝(CHB)患者的HBVBCP区A1762T!使用LightCyler全自动DNA扩增仪，试剂盒由中G1764A双突变位点进行突变检测，以探讨该位山大

6、学达安基因有限公司生产，试剂盒的检出限点突变与宁夏地区HCC的关系。度为100IU·mL～，线性范围2．0X10一1资料与方法1．0X10。i．1临床资料收集于2009年1月一2010年51．2．2巢式PCR扩增和测序以VIRALDNA月来自宁夏地区宁夏医科大学总医院、宁夏人民kit试剂盒(购自0MEGA公司)抽提HBVDNA，试验按说明书规范操作。目的基因片段扩增采用医院、银川市第一人民医院和回族居住相对集中巢式PCR，外套正向引物为5’一TYACGTC—CCGTCGGCGCTGAATC一3’(nt1425—1447)，夕收稿日期：20

7、13—05—13基金项目：2011年宁夏科技攻关项目套反向引物为5’一GTATGGTGAGGTGARCAATG作者简介：闪明海，男，硕士，主治医师，从事消化内科工作。一3’，第二轮内套正向引物为5’一GCATG—通信作者：杨少奇，男，博士，硕士生导师，主任医师，副教授。GARACCACCGTGAAC一3’，内套反向引物5’一2期闪明海，等．宁夏地区乙型肝炎病毒基因BCP区A1762T／G1764A突变与肝细胞癌的相关性．149．CGATACAGAGCWGAGGCGGT一3’。第一轮PCR表2CHB组和HCC组HBVA1762-r／G176

8、4A总体系为25L，含有2XPCRMasterMix12．5L双突变情况(2×PCRmaster为3mmol·L～MgC12、0．2mmol·LdNTp和0．1U·LTaqDNA聚合酶的混合物