刺槐素对小鼠Th17细胞的分化功能的影响及其机制的初步探讨-论文.pdf

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1、·1O·中华哮喘杂志(电子版)2013年12月第!鲞箜塑垒!旦!垦!：旦望!!!!：!!：．论著．刺槐素对小鼠Thl7细胞的分化功能的影响及其机制的初步探讨陈菲菲查王健吴桢珍刘亚南杨光宇朱雯黄茂【摘要】目的建立小鼠Thl7细胞的体外诱导及培养方法并探索刺槐素(Acacetin)对Th17细胞的分化、功能的影响及其机制的初步探索。方法分离、纯化BABI／C小鼠脾脏CD4CD62IT细胞，用转化生长因子8、II一6、II23等促进CD4CD62IT细胞向Thl7细胞分化。培养的Thl7细胞分为五组：正常组、模型对照组、Aca

2、cetin1／,M组、Acacetin10M组、Acacetin30／aM组。流式细胞术检测Thl7细胞的比例，酶联免疫吸附试验检测IL一17A的表达，实时荧光定量聚合酶链反应检测II一17AmRNA及ROR一7tmRNA的表达。结果该培养方法可使Thl7细胞的比例明显升高(Pd0．01)。与模型对照组相比，AcacetinlM组、Acacetin10M组、Acacetin30M组的Thl7细胞的比例呈剂量依赖性降低(P值均d0．05)。II一17A蛋白的表达也呈剂量依赖性降低(P值均<0．05)，II一17AmRNA和

3、ROR一7tmRNA的表达与模型对照组比较明显降低(Pd0．05)，以Acacetin(30／xM)组最明显(P<0．01)。结论Acacetin在体外可以抑制小鼠脾脏CD4CD62IT细胞向Thl7细胞的分化，并抑制II17AmRNA和II一17A蛋白的表达，其机制可能与抑制细胞内孤儿受体ROR一7t的表达有关。【关键词】刺槐素；CD4CD62I一T细胞；诱导；白介素17TheeffectofAcacetinonthedifferentiationandfunctionsofTh17cellsCHENFei-fei，Z

4、HAWang—jian，wUZhen—zhen，Ln，Ya—nan，YANGGuang—yu，ZHUWen，HUANGMao．DepartmentofRespiratoryMedicine．theFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity，Nanjing210029，ChinaCorr声0igauthor：q-IUANGMao，Eail：hm6114@126．corn[Abstract]ObjectiveToestablishainducedandculturepr

5、otocolforThl7cellsinvitro，evaluatetheeffectofAcacetinonthedifferentiationandfunctionsofThl7cellsandexplorethemechanismsinvoled．MethodsSplenicCD4CD62ITcellsofBALB／cmicewereisolatedandpurifiedwithmagneticbeadmethods，andwerecoculturedwithtransforminggrowthfactor(TGF

6、)一8、interleukin(II)6、1I一23forThl7一polarization．TherewerefivegroupswiththeculturedThl7cells：thenormalgroupwithnothinginducedfactors；theinducedgroup，inwhichTcellswereculturedwiththeaboveprotocol；Acacetin1Mgroup；Acacetin10Mgroup；Acacetin30Mgroup．TheproportionofThl7c

7、ellswasdetectedwithflowcytometryElISAdetectedthelevelsofII一17A：Reversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT—PCR)detectedtheexpressionofII一17AmRNAandROR一7tmRNA．ResultsComparedwiththenormalgroup，theproportionofThl7cellsculturedwiththeprotocolweresignificantlyhigh

8、er(P<0．05)．Comparedwithgroupmodel，theThl7cellsproportioninAcacetin1M、Acacetin10／,M、Acacetin30Mgroupsweresignificantlydecreased，thereisdosedependent(P<0．05)．The