奶牛亚急性瘤胃酸中毒对肝脏内组胺代谢及NF-κB炎性信号通路的影响-论文.pdf

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1、AnimalHusbandry＆VeterinaryMedicine2014Vo1．46No．6奶牛亚急性瘤胃酸中毒对肝脏内组胺代谢及NF—KB炎性信号通路的影响路丹，张凯，徐天乐，徐磊，沈向真(南京农业大学动物医学院，江苏南京210095)摘要：为研究奶牛亚急性瘤胃酸中毒(SARA)时血液内组胺浓度的变化及对奶牛炎性信号通路的影响，通过对健康奶牛饲喂高精料日粮，诱发亚急性瘤胃酸中毒，手术安装血管瘘管，采集门静脉和肝静脉血液样品，组胺ELISA试剂盒检测血液中组胺含量，并通过RT-PCR对在体肝脏中的NfKB、环氧合酶一2(

2、COX一2)、IL一6、TNF—o【表达水平进行相对定量和绝对定量检测。结果表明，高精料组奶牛门静脉内组胺浓度较对照组均有所增加，高精料组组胺平均浓度(19．99~0．21)g／L，较低精料组(18：12~0．35)g／L差异显著(P<0．05)；高精料奶牛的组胺平均清除率(57．23％)显著高于低精料组(50．28％)，说明高精料组奶牛组胺在肝脏内代谢率高于低精料组；高精料组NF—KB、COX-2、IL-6和TNF—a的表达较低精料组均有升高，且NF—KB、COX一2、IL一6和TNF—n四个基因的表达有显著升高(P<0．

3、05)。本试验证明了奶牛SARA中血液内组胺浓度的升高可诱导肝脏对其转化和降解的效率增加，且组胺含量的增高可诱导奶牛肝脏中NF—KB信号通路的打开，进而导致COX一2等炎性基因表达。关键词：奶牛；肝脏；组胺；NF—KB；COX一2中图分类号：$858．23文献标志码：B文章编号：0529—5130(2014)06—0098—04现代奶牛业规模化、集约化养殖中，为满足奶牛这一信号通路又可作用于炎性细胞，使其大量合成和高泌乳的能量需要而大量使用高精饲料。但反刍动物分泌COX一2、TNF一0【、IL一1等炎性因子，进一步促食入过多

4、碳水化合物会产生大量挥发性脂肪酸进炎症发生j。本试验以成年泌乳奶牛为试验对象，(VFA)，降低瘤胃内pH，扰乱瘤胃内生理平衡，从在符合动物正常采食模式下，饲喂高NFC／NDF水平而引发亚急性瘤胃酸中毒(subacuteruminalacidosis，的饲料，诱导奶牛发生SARA，继而测定血液中组胺SARA)。SARA无明显的临床症状，往往呈慢性经浓度的变化，并检测肝脏COX一2、TNF一仪、IL一1的过，不会导致患病动物急性死亡，因而被养殖者忽表达水平变化，分析组胺变化与COX一2等炎性相关略。据统计，在商业化奶牛场里，SA

5、RA在泌乳早基因表达和NF—KB信号通路的关系，从分子水平探期和中期成母牛中的发病率为20％lL3j。因此，SARA讨SARA的作用机制，为进一步揭示SARA的发病机的诱因及防治越来越受到生产者的关注。研究表明，理提供参考。SARA的发生与动物体内组胺含量密切相关。组胺1材料与方法(histamine)在体内由组氨酸经组氨酸脱羧酶(HDC)脱羧基生成，储存于肥大细胞和嗜碱性粒细1．1试验动物胞中。病理条件下，组胺由上述细胞中释放进入选用健康状况良好，3～5岁，体重(502±2)血液，当血液组胺超过机体正常代谢能力时，就引起，

6、处于泌乳中期的成年荷斯坦奶牛6头，手术安装机体炎症反应。环氧合酶一2(COX一2，cyclooxygen．永久性肝脏血瘘管，恢复期为14d，2013年2月一ase一2)是一种环氧合酶家族中的诱导型酶，当出现2013年10月饲养于南京农业大学江浦试验农场，随组织损伤、炎症、肿瘤等情况，其表达显著增多。当机分为2组，分别饲喂精粗比4：6和6：4的日粮，奶牛发生SARA时，由于瘤胃内微生物异常大量繁自由饮水。殖，产生的代谢物将导致炎性因子如COX一2、TNF—1．2试剂与仪器主要试剂：TrizolTotalRNAReagent(T

7、aKaRa)，、IL-1等表达增加，进而激活NF—KB等信号通路，DNAMaker，TaqPCRMasterMix，ReverseTran-scfiptase，PrimeScriptRTMasterMix(TaKaRa)，引物收稿日期：2014-03—1l合成自大连宝生物科技有限公司。主要仪器包括：匀基金项目：国家973项目(2011CB100802)资助浆仪，肝素钠真空采血管，电泳仪，水浴锅，Tanon作者简介：路丹(1989一)，女，硕士研究生，E．mail：Deborahloo凝胶成像仪(上海天能)，紫外分光光度计，冷

8、冻离@163．con心机(德国Eppendorf公司)，PCR仪，酶标仪等。通信作者：沈向真，教授，博士，博士生导师，E—mail：x．Z．shen@njau．edu．cn1．3试验设计采用2x2拉丁方设计，随机分为2组，每组3畜牧与兽医2014年第46卷第6期头，分别饲喂精粗比4：6(对