亚急性瘤胃酸中毒对奶山羊瘤胃上皮屏障功能影响机制的研究

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：I匦遗蠡日期：勒比：笸：』壁一内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识产权的规定

2、，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：盈蔓塑壹指导教师签名：丝日期：丝l垡：笸：血摘要本研究采用光镜和电镜技术观察瘤胃上皮组织形态及超微结构的改变，采用Ussingchamber检测瘤胃上

3、皮生理特征参数及HRP的流速，通过RT-PCR和Westernblot从转录和翻译水平分析瘤胃上皮紧密连接蛋白的表达，以期从形态学、上皮通透性和基因表达方面揭示SARA对瘤胃上皮屏障功能的影响及其机制。本研究包括四个部分：1、奶山羊SARA模型的建立选用6只安装有永久性瘤胃瘘管的泌乳期萨能奶山羊，采用自身对照试验设计，通过饲喂非纤维性碳水化合物与中性洗涤纤维(NFC／NDF)比分别为1．40、1．79、2．3l、3．23的4种日粮进行诱导，每期15天，后3天采用动态pH值连续监测记录系统对瘤胃pH值进行24h连续监测。结果表

4、明：当同粮NFC／NDF=3．23，NFC摄入量为577．59，NDF摄入量为178．79时，瘤胃pH值介于5．2．-一5．5之问持续时间长达3．83h／d，表明成功建立奶山羊SARA模型。2、SARA对瘤胃上皮形态结构的影响选用9只泌乳期萨能奶山羊，按体重相近原则随机分为三组，即对照组(n：3)，SARA组(n-3)和恢复组(n_3)。对照组：饲喂基础日粮(NFC／NDF为1．40)，SARA组和恢复组：通过依次饲喂NFC／NDF比为1．40、1．79、2．3l、3．23的日粮诱导SARA发生，具体见试验一：恢复组：SAR

5、A诱导成功后试验动物自由采食青干草4周，进入恢复期。每期试验结束屠宰试验动物，采集瘤胃腹囊组织，采用石蜡切片和透射电镜技术对瘤胃上皮形态结构进行观察。组织切片结果显示：SARA组瘤胃上皮细胞松散，不规则，瘤胃上皮角质层厚度显著增加(PO．05)。电镜结果显示：与对照组相比，SARA组瘤胃上皮细胞界限模糊，棘状层出现空泡。紧密连接结构被破坏，细胞间隙增大。恢复组奶山羊瘤胃上皮有部分区域恢复的较好，表现在紧密连接的数量均多于对照

6、组和SARA组，损伤较严重的地方并未很好的恢复，紧密连接结构松散，细胞与细胞之问有空洞出现。3、SARA对瘤胃上皮通透性的影响试验动物和试验设计同试验二。利用尤斯灌流系统对瘤胃上皮的电生理特征及辣根过氧化物酶流速进行测定，研究SARA对奶山羊瘤胃上皮通透性的影响。结果表明：与对照组相比，SARA组和恢复组显著提高了瘤胃上皮Isc、Gt和HRP流速(P<0．05)，而显著降低了瘤胃上皮PD(尸O．05)，提示SARA引起了瘤胃上皮通透性增加，而且恢复组瘤胃上皮仍然维持这种较

7、高的通透性。4、SARA对瘤胃上皮紧密连接蛋白表达的影响试验动物和试验设计同试验二。采用实时定量PCR和Westernblot技术检测瘤胃上皮紧密连接蛋白ZO．1、Occludin和Claudin．1mRNA表达量和蛋白表达量。Real-timePCR结果显示：紧密连接基因ZO．1、Occludin和Claudin．1mRNA表达量SARA缎和恢复组均显著低于对照组(尸<0．05)，SARA组的ZO—l和OccludinmRNA表达水平低于恢复组(JP>0．05)，Claudin．ImRNA表达水平显著低于恢复组(P<0．0

8、5)。Westernblot结果显示：奶山羊瘤胃上皮紧密连接蛋白Occludin、ZO．1和Claudin一1蛋白表达量SARA组最低(P0．05)但显著低于对照组(尸<0．05)。这些结果提示SARA使瘤胃上皮紧密连接基因ZO—l、O