乙型肝炎病毒表面抗原特异性结合肽的筛选与鉴定-论文.pdf

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1、检验医学与临床2014年3月第1l卷第5期IabMedClin，March2014，Vo1．11，No．5·论著·乙型肝炎病毒表面抗原特异性结合肽的筛选与鉴定孙呜，马智勇，黄朝阳。，胡斌趴，沈关心。(1．厦门大学附属第一医院生殖医学科，福建厦门361003；2．华中科技大学同济医学院免疫学系，湖北武汉430030；3．厦门大学附属第一医院检验科，福建厦门361003)【摘要】目的筛选并鉴定与乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)特异性结合的多肽。方法将酵母表达的HBsAg包被在微孔板上，eX,z．噬

2、菌体进行随机肽库筛选，经过4轮筛选后，随机挑取15个克隆进行DNA测序，并通过夹心EIISA方法鉴定其亲和力，采用剂量依赖结合实验和竞争抑制实验检测其与HBsAg结合的特异性。结果经过4轮筛选，得到一优势克隆No．3，展示肽段为SSYAPYVWQPIA，与HBsAg有较强的亲和力，剂量依赖结合实验和竞争抑制实验证明克隆No．3与HBsAg的结合是特异性的。结论利用噬茵体展示肽库技术可以获得HBsAg特异性结合肽，此多肽可以作为靶向分子用于乙型肝炎的基因治疗，为乙型肝炎的靶向基因治疗奠定实验基础。

3、【关键词】乙型肝炎病毒；乙型肝炎病毒表面抗原；噬茵体展示；结合肽DoI：10．3969／j．issn．1672-9455．2014．05．001文献标志码：A文章编号：1672-9455(2O14)O5一O577一O3ScreeningandidentificationofHBVsurfaceantigenspecificbindingpeptideSUNMing。MAZhi—yong。HUANGChao—yang。，HUBin，SHENGuan—xin(1．DepartmentofReprod

4、uctiveMedicine，theFirstAffilia—tedHospitalofXiamenUniversity，Xiamen，Fujian361003，China；2．DepartmentofImmunology，TongjiMedi—calcollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan，Hubei430030，China；3．DepartmentofClin—icalLaboratory，theFirstAfiliated

5、HospitalofXiamenUniversity，Xiamen，Fujian361003，China)[Abstract]ObjectiveToselectandidentifythepeptidethatspecificallybindswithHBVsurfaceantigen(HB—sAg)．MethodsHBsAgderevedfromyeastwascoatedonmiliporeplate，phagewasaddedtoscreenpeptideran—domly．Afterfo

6、urroundsofscreening，15phagecloneswereselectedrandomly，thephageDNAwereextractedandsequenced．AndtheiraffinitieswereidentifiedbythesandwichELISA，thespecificitywasidentifiedbythedoesde—pendentbindingtestandcompetitiveinhibitiontest．ResultsAfterfourrounds

7、screening，apredominantphagecloneNo．3wasobtainedwhichcouldcomparativelystrongbindwithHBsAg，andthisclonedisplayedapeptidesequenceofSSYAPYVWQPIA．HBsAgdosedependentbindingtestandcompetitiveinhibitiontestshowedthatNo．3bindingwithHBsAgwasspecific．Conclusio

8、nPeptidesspecificallybindingtoHBsAgcouldbeobtainedthroughthescreen—ingofphagedisplaypeptidelibrary．ThesepeptidesmaybeusedintargetgenetherapyofhepatitisB．ItwillprovideexperimentfoundationoftargetgenetherapyofHBVinfection．[Keywords]hepatitisBvirus；HBsA