丹皮酚对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经元EAA、NMDA受体表达的影响及机制探讨-论文.pdf

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1、山东医药2013年第53卷第47期丹皮酚对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠海马神经元EAA、NMDA受体表达的影响及机制探讨宋宁宁，李剑。刘向红，高海青(1山东大学齐鲁医院，济南250012；2济南市第五人民医院)摘要：目的观察丹皮酚对缺糖缺氧(OGD)~注损伤大鼠海马神经元兴奋}生氨基酸(EAA)、N．甲基．D．天门冬氨酸(NMDA)受体表达的影响，探讨该药的神经保护作用机制。方法原代培养新生大鼠海马神经元8～12d后随机分为4组，其中对照组正常换液培养；模型组、丹皮酚组、地佐环平(MK-801)组均制备OGD再灌注损伤模型，在此基础上丹皮酚组于每个再灌注时间点前分别加入丹皮酚，MK．801

2、组则加入MK一801溶液；倒置相差显微镜下观察神经元一般形态学变化，用M'IT法测定神经元存活率，分别采用放射配基结合实验及RT-PCR法测定NMDA受体结合力、NR1亚基mRNA表达，以氨基酸分析仪检测EAA含量。结果模型组神经元肿胀或变形，突起缩短并逐渐消失，胞质内颗粒变性明显、甚至完全崩解；丹皮酚组及MK-801组神经元形态改变均较模型组减轻，胞体完整，突起较清楚，基本保持完整。与对照组比较，模型组神经元存活率明显降低，NMDA受体结合力、NR1亚基mRNA表达及E从含量明显升高，而丹皮酚组及MK-801组上述指标均较模型组明显改善(P均<0．05)。结论丹皮酚对离体培养的大鼠

3、海马神经元OGD再灌注损伤具有保护作用，其作用机制可能与抑制EAA及NMDA受体表达有关。关键词：丹皮酚；神经元；缺糖缺氧再灌注损伤；N一甲基一D一天门冬氨酸受体；兴奋性氨基酸doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2013．47．002中图分类号：R741．05文献标志码：A文章编号：1002-266X(2013)47-0004-04EfectofpaeonolonEAA．NMDAreceptorinculturedrathippocampalneuronssubjectedtooxygen—glucosedepriVation／reperfusion—induc

4、edinjurySONGNg—ningL，LIJian，LIUXiang—hong，GAOHai—qing(1QiluHospital，ShandongUniversity，Jinan250012，China)Abstract：ObjectiveToobservetheefectofpaeonolonexcitatoryaminoacid()，N-methyl—D-aspartate(NMDA)receptorexpressioninculturedrathippocampalneuronssubjectedtooxygen—uc0sedeprivation／reperfusion(

5、OGD／R)一inducedinjuryandtoinvestigateitsneuroprotectivemechanism．MethodsWedi~dedrathippocampalneuronswhichwereprimarilyculturedfor8-12dintofourgroups：thecontrolgroup，OGD／Rgroup，paeonoltreatmentgroupandMK一801group，andthenweestablishedthemodelsofOGD／R—inducedinjury，paeonolandMK-801solutionweresepa

6、ratelyinjectedintoratsofthepaeonoltreatmentgroupandMK-801groupateachreperfusiontimepoints．ThemorphologicalchangesofneulFonswereobservedbytheinvertedphase·contrastmicroscopy，theneuronviabilitywasmeasuredbyMTrassay，thebindingforceofNMDAreceptorwasvaluatedbyliquidscintillationcounting，theexpressio

7、nofNMDAreceptorNR1subtmitmRNAwasdetectedbyRT-PCR，andthecontentofEAAwasdetectedbyaminoacidanalyzer．ResultsNeuronsintheOGD／Rgroupwereswollenordeformed．withshortprocessesandthengraduallydisappeared；thegranulesofcytoplasmweresignifica