人肝细胞生长因子受体启动子荧光素酶表达载体的构建及活性测定-论文.pdf

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1、第23卷第26期中国现代医学杂志Vo1．23No．262013年9月ChinaJoumalofModernMedicineSep．2013文章编号：1005-8982(2013)26—0026-04·论著·人肝细胞生长因子受体启动子荧光素酶表达载体的构建及活性测定木李祯，生秀杰，孙曼，汪志辉，刘启才[1．广州医科大学附属第三医院妇产科研究所(广东省普通高校生殖与遗传重点实验室)，广东广州510150；2．广州医科大学实验医学研究中心，广东广州510000)摘要：目的构建含人肝细胞生长因子受体(c—MET)启动子-223～+60区域的荧光素酶报告基因质粒，并测定其在卵巢癌细胞

2、株中的活性。方法应用PCR法扩增获得含有人C—MET基因启动子一223～+60区域的DNA片段，将其连接至荧光素酶质粒pGL3一Basic中，得到pGL3-C-MET-Promoter重组质粒；经限制性内切酶酶切及测序得以鉴定；将该质粒转染4株卵巢癌细胞，检测细胞中荧光素酶的活性。结果双酶切及测序结果证实pGL3一C—MET—Promoter重组质粒插入片段序列正确，克隆的C—MET基因片段具有启动子活性，在卵巢癌细胞株OVCAR3细胞中的活性最高。结论成功构建了pGL3一C—MET—Promoter报告基因重组质粒，为进一步研究C—MET对卵巢癌生物学行为的影响奠定了基础

3、。关键词：肝细胞生长因子受体；卵巢癌；启动子中图分类号：R737．31文献标识码：AConstructionofluciferaseexpressionvectorcontainingC-METandcharacterizati0nofthepromoteractivityLIZhen，SHENGXiu-jie，SUNMan，WANGZhi-hui，LIUQi—caif1．DepartmentofObstetricsandGynecology,theThirdAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalCollege／KeyLaboratoryo

4、fReproductionandGeneticsofGuangdongHigherEducationInstitutes，Guangzhou，Guangdong510150,P．R．China,"2．ExperimentalMedicalResearchCenterofGuangzhouMedicalCollege，Guangzhou，Guangdong510000,P．R．China)Abstract：【objectives】Tomakealuciferasereportergeneconstructwithpromoterregion一223～+60fromhumanC

5、—METgene。andtodetermineitsactivityintheovariancancercelllines．【Methods1The一223～+60regionofC—METpromoterwasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)andrecombinatedintopGL3一Basicvector．TherecombinatedplasmidpGL3一C—MET—Promoterwasconfirmedbyrestrictionanalysisandsequencing．Transcienttransfected

6、pGL3一C—MET—Promoterintofourovariancancercelllinesanddetecteditsactivity．【Results】Theresultsshowedthatthesequenceofclonedpromoterwasright，thepromoterconstructhashigheractivityinOVCAR3cellscomparedtoothers．【Conclusion1The1uciferasereportergenevectorcontainingC—METpromoterhasbeensuccessfullyc

7、onstructedanditestablishesthefoundationtofutureresearchontheinfluencetothebiologybehaviousofovariancancer．Keywords：hepatocytegrowthfactorreceptor；ovariancancer；promoter肝细胞生长因子受体(hepatocytegrowthfactor属于原癌基因，定位于人类第7号染色体(7q21～receptor，C-MET)为受体酪氨酸激酶家族成员之一，31)，大小