T细胞亚群与慢性丙型肝炎病毒相关性分析-论文.pdf

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Mar；49(3)·327·◇临床医学研究◇T细胞亚群与慢性丙型肝炎病毒相关性分析殷先尧，郑美娟，徐元宏摘要目的探讨外周血中T淋巴细胞亚群与慢性丙型肝1材料与方法炎(CHC)患者丙型肝炎病毒(HCV)复制程度的关系。方法采用流式细胞仪直接免疫荧光法检测69例CHC患者、201．1病例资料收集2012年10月～2013年7月例正常健康者外周血中的T细胞亚群；利用荧光定量PCR安徽医科大学第一附属医院门诊及住院的69例法检测患者血清HCVRNA。结果①CHC患者CD4T

2、细CHC患者，其中男23例，女46例，年龄17—67胞百分率[(42．87±6．11)]及CD4／CD8比值[(1．34±(45．8±13．8)岁，诊断均符合2011年《丙型肝炎防0．25)]明显低于正常健康者[(49．55±6．68)]和[(1．82-t-治指南》的诊断标准j，并排除合并其他病毒性肝O．11)](P<0．01)，而CD8T细胞百分率[(32。78±5．48)]则高于正常健康者[(27．35±4．32)](P<0．01)，CD3T细炎、自身免疫性疾病、酒精性肝病、肝硬化、肿瘤、代胞百分率差异无统计学意义(P>0．05)。②随着HCVRNA

3、谢性疾病及严重基础疾病，实验检查前6个月均无复制载量的增加，CD8T细胞百分率逐渐增加，而CIMT抗病毒和免疫调节药物治疗。按照不同的HCV细胞百分率及CD4／CD8比值逐渐降低。结论CHC患RNA载量水平分为高载量组、中载量组、低载量组者外周T淋巴细胞亚群比例改变，可能是HCV感染慢性化作为实验组，其中高载量组的HCVRNA载量为>的重要原因之一。随着HCVRNA表达水平的升高，可能是1．00X10copies／ml；中载量组的HCVRNA载量为导致T淋巴细胞应答能力下降的重要原因。1．00X10。一1．00×10copies／ml；低载量组的HCV关

4、键词HCVRNA；T淋巴细胞亚群；相关性RNA载量为<1．00×10。copies／ml。另选年龄和性中图分类号R392．11别匹配的健康体检者20例作为正常对照组，年龄文献标志码A文章编号1000—1492(2014)03—0327—0436—59(44．6±6．6)岁。实验组及正常对照组肝肾功能各项指标处于正常范围。慢性丙型肝炎(chronichepatitisC，CHC)是全1．2仪器和试剂COULTEREpicsXLMCL流式细球范围的重要公共卫生问题之一，全世界约2亿人胞仪为美国BECKMANCOULTER公司；CD3／CD4／El感染丙肝病毒

5、(hepatitisCvirus，HCV)，其中54％CD8荧光标记单克隆抗体及红细胞裂解液为Opti-一86％的感染者6个月内出现感染慢性化，形成持Clone原装配套试剂；PCR扩增仪为瑞士Roche公司续性感染。我国是该病的高发地区，感染率约为3．2％【13的Light—Cycler荧光定量核酸扩增仪；HCV核酸定量。患者病程变化与T淋巴细胞亚群数量和试剂盒为上海科华生物工程股份有限公司产品。功能的相关性，已被多项研究证明可能是致病及慢1．3方法性化因素J。CHC慢性化的机制，尤其是宿主的免1．3．1HCVRNA载量检测采用实时荧光定量疫因素引起的免

6、疫反应已成为研究的热点之一。该PCR法，严格按照试剂说明书步骤进行，HCVRNA研究对患者外周血T淋巴细胞亚群及血清中HCV检测单位用copies／rnl表示。RNA复制载量水平进行检测，并对其之间相互关系1．3．2T细胞亚群检测取CHC患者及正常健康进行了分析，以了解CHC患者机体的免疫功能紊乱者外周静脉血1ml，EDTA．K抗凝。于干净试管中情况，旨在对CHC发病机制及其防治提供一定的理加入20l三标记单克隆抗体CD4一PE／CD8．ECD／论依据。CD3一PC5，再加入100l抗凝静脉血，充分混匀，252013—11—10接收℃避光孵育15min，

7、加入红细胞溶解液250Ixl，充分基金项目：国家自然科学基金(编号：81302525)溶解红细胞20min后，以1200r／min的速度离心5作者单位：安徽医科大学第一附属医院检验科，合肥230022min，去上清液，PBS缓冲液冲洗2次，最后以500Ixl肥西县中医院检验科，肥西231200的PBS缓冲液悬浮细胞，流式细胞仪检测10000个作者简介：殷先尧，男，硕士研究生；徐元宏，男，教授，硕士生导师，责任作者，E·mail：xy·淋巴细胞，各细胞亚群用百分比表示。hong1964@163．coin1．4统计学处理采用SPSS17．0统计软件进行安徽医

8、科大学学报ActaUniversitati~Medicinali~Anhui20