丙型肝炎病毒核酸检测试剂国家参考品的制备-论文.pdf

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1、中国生物制品学杂志2014年8月第27卷第8期ChinJBiologicalsAugust2014．Vo1．27No．8·1035·诊断制剂丙型肝炎病毒核酸检测试剂国家参考品的制备刘悦越，刘艳，杜加亮，范行良，高加梅，国泰中国食品药品检定研究院肠道病毒疫苗室，北京100050摘要：目的制备丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)核酸检测试剂国家参考品。方法收集我国不同地区的献血员血浆，用核酸筛查试剂筛查HCVRNA情况，并通过PCR法对人细小病毒B19进行定性测定，筛选阳性参考品、阴性参考品和最低检

2、出限参考品。对HCVRNA阳性样本进行基因分型；3家实验室以WHOHCVRNA国际标准品为对照品，对参考品进行协同标定；并检测参考品的稳定性和适用性。结果筛选出10份HCV阳性，而HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阳性参考品，其中有6份为1b型，1份为2a型，1份为3a型，1份为3b型，1份为6a型；10份HCV、HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阴性参考品；1份冻干的HCVRNA阳性，HBV、HIV、B19为阴性的样本作为最低检出限参考品，基因型为1b型。3个实验室经协作标定，阴性参考品的结果均为阴

3、性，阳性参考品的HCVRNA浓度在104～10Iu／ml之间，最低检出限参考品的HCVRNA浓度为6．18×106IU／ml。一20℃放置4周、4℃放置12d、室温放置7d以及反复冻融5次对参考品的HCVRNA含量无明显影响。参考品适用于目前国内市场上主要国产血液筛查和定量试剂的检测。结论制备了HCV核酸检测试剂国家参考品，可用于HCV核酸诊断试剂的质量评价和控制。关键词：丙型肝炎病毒；核酸；诊断；参考品中图分类号：R373．2+1R392—33文献标识码：A文章编号：1004．5503(2014)08—1035

4、．04PreparationofnationalreferencepanelsfordiagnostickitsforhepatitisCvirusnucleicacidLIUYue-yue，LIUYan，DUJia—liang，FANXing-1iang，GAOJia-mei，GUOTaiNationalInstitutesforFoodandDrugControl，Be~jing100050，ChinaCorrespondingauthor：GuoTai，E-mail：guotai@nifdc．org．cnA

5、bstract：ObjectiveTopreparethenationalreferencepanelsfordiagnostickitsforhepatitisCvirus(HCV)nucleicacid．MethodsPlasmasamplesofblooddonorsinvariousregionsinChinawerecollectedandscreenedforHCVRNAbybloodscreeningreagents，andtestedforhumanparvovirusB19byPCR，based

6、onwhichpositiveandnegativereferencepanelsaswellasreferenceforminimumdetectionlimitwerescreened．ThesamplespositiveforHCVRNAweregenotyped．ThecandidatereferenceswerecollaborativelycalibratedbythreelaboratoriesusingWHOHCVRNAstandardasacontrol，andevaluatedforstabi

7、lityandapplicability．ResultsTensamplespositiveforHCVbutnegativeforHBV，HIVandB19werescreenedaspositivereferences，ofwhich6wereofgenotypelb，onewasof2a，onewasof3a，onewasof3b，andonewasof6a．TensamplesnegativeforHCV，HBV，HIVandB19werescreenedasnegativereferences．Onef

8、reeze-driedsamplepositiveforHCVRNAbutnegativeforHBV．HIVandB19wasseveredasthereferenceforminimumdetectionlimit，whichwasofgenotypelb．Collaborativecalibrationshowedthatalltheresultsofnegativ