MdmX在Axin-p53信号通路中的调控机制-论文.pdf

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1、第53卷第1期厦门大学学报(自然科学版)Vo1．53No．12014年1月JournalofXiamenUniversity(NaturalScience)Jan．2O14MdmX在Axin—p53信号通路中的调控机制贺颖，叶志云(厦门大学生命科学学院，福建厦门361102)摘要：鼠双微体基因x(MdmX)是肿瘤抑制因子p53信号通路中重要的负调控蛋白，它能与p53直接结合，抑制p53的转录活性．体轴发育抑制因子Axin作为构架蛋白与p53及同源结构域互作蛋白激酶2(HIPK2)等相互作用形成复合物，诱导p53的转录活化，共同促进细胞的凋亡．本研究将Md

2、mX引入Axin-p53信号通路的调控中，发现MdmX通过竞争Axin与p53的结合，抑制Axin诱导p53的转录激活．p53结合区域缺失的MdmX突变体MdmXAp53则不能抑制Axin对p53的激活．这些实验结果为进一步深入研究Axin—p53信号通路在细胞凋亡及肿瘤发生发展中的作用提供了重要的理论依据．关键词：鼠双微体基因x(MdmX)；Axin；p53中图分类号：Q291文献标志码：A文章编号：0438—0479(2014)01—0110—05鼠双微体基因X(MdmX，亦称Mdm4)是1996的泛素化降解_】，而MdmX与Mdm2的结合又可稳年发

3、现的一个新的p53结合蛋白u]，由于它与另一个定Mdm2，抑制其降解l_】．两者在p53通路中的调节p53结合蛋白鼠双微体基因2(Mdm2)在结构上高度与它们之间的表达水平密切相关，当MdmX与Mdm2相似，因而被命名为MdmX．它与Mdm2在结构上同在细胞内水平相当时，它们共同抑制p53的活性；而源，分别由490和491个氨基酸组成[2]．2个蛋白都具当MdmX表达量较高时，则可稳定p53的表达．有相似的功能区：N端p53结合区，介导对p53的转体轴发育抑制因子Axin是一个重要的架构蛋白，参与Wnt、JNK、TGF-／?及p53等多种信号转导途径的录

4、调控，该区结构在2种蛋白中严格保守；中央区锌调控_】。。．在p53信号通路中，Axin与p53、HIPK2及指结构，由第301～329个氨基酸构成，其功能均未知E4]；C端RING结构区，该区是这2个蛋白形成同源Daxx等相互作用形成复合物，诱导p53的转录活化，共同促进细胞的凋亡_1．我们曾报道过Mdm2在Axin-或异源二聚体的关键，也是Mdm2作为泛素连接酶的p53通路中不依赖于其泛素连接酶的抑制功能l2．核心，但MdmX的RING结构域却不具备泛素连接酶Mdm2可通过竞争结合p53与HIPK2破坏Axin／p53／功能l5]．MdmX和Mdm2的

5、蛋白结构主要差异部分在HIPK2活化复合体的形成，从而抑制p53的转录激活中央酸性区_4]；另外，Mdm2具有核定位信号(NLS)及其诱导的细胞凋亡_2．然而，MdmX是否参与Axir卜及出核信号(NES)，而MdmX则没有_2]．在生物学功p53信号通路的调控，其作用机制等仍未知．基于MdmX能上，MdmX和Mdm2均为p53信号通路中重要的调与Mdm2在结构上的相似性及其在p53信号通路的重控因子，两者的功能各不相同，无法互相替代．敲除要作用，本文对MdmX在Axin-p53信号通路中的作用Mdm2的小鼠胚胎因激活p53依赖的细胞凋亡通路进行了研究．

6、研究表明：与Mdm2相似，MdmX也能通过而死亡，敲除MdmX的小鼠胚胎则因依赖p53的细竞争Axin与p53的结合，从而抑制Axin对p53的转录胞增殖抑制而死亡，但若同时敲除p53基因，胚胎均激活．这一发现有助于全面了解MdmX的细胞生物学能正常发育_91．Mdm2和MdmX在p53信号通路中功能，丰富了Axin-p53信号通路的调控机理，并可为肿的调控关系非常复杂，Mdm2可以介导自身及MdmX瘤的临床治疗提供新的线索．1材料与方法收稿日期：2Ol308—131．1材料基金项目：国家自然科学基金(31101014)*通信作者：hey@xmu．edu

7、．cn使用的大部分药品与试剂分别购自美国Sigma第1期贺颖等：MdmX在Axin—p53信号通路中的调控机制公司、上海生工(Sangon)生物工程公司和华美(Sino—入适量的培养液，重悬浮细胞并均匀地平铺在60mmAmerica)生物工程公司；限制性内切酶和DNA标准培养皿中，保持细胞密度约为4O～60．转染前1h分子质量Marker购自大连宝生(Takara)生物工程公更换细胞培养液，小心加入约5mL预热的新鲜培养司；碱性磷酸酶(CIP)购自美国Promega公司；液，以免使贴壁好的细胞悬浮起来．磷酸钙一DNA沉淀KlenowDNA聚合酶、T4DN

8、A连接酶(T4Ligase)、的制备：在1．5mL离心管中加入220L水，在水中