口服齐墩果酸所致胆汁淤积性肝损伤研究-论文.pdf

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1、毒理学杂志2013年lO月第27卷第5期JToxicolOctober2013Vo1．27No．5中图分类号：R994文献标识码：A文章编号：1002—3127(2013)05—0363—05·实验研究·口服齐墩果酸所致胆汁淤积性肝损伤研究万晓莉，曾奎，张丹，刘杰，陆远富(1．遵义医学院药理学教研室贵州省基础药理重点实验室，贵州遵义563000；2．黔南名族医学高等专科学校)【摘要】目的观察齐墩果酸(oleanolicacid，OA)所致小鼠胆汁淤积性肝损伤，并探讨其肝毒性的可能机制。方法雄性昆明小鼠

2、，随机分为溶剂对照组，OA225mg／kg组、450ms／kg组、900mg／kg组和1350mg／kg组，给药组采用灌胃给药，溶剂对照组采用玉米油等体积灌胃，1次／d，连续10d，末次给药24h后收集小鼠血和肝组织，计算小鼠肝系数，分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(T—BIL)、直接胆红素(D—BIL)；观察肝病理组织学变化；并应用实时定量RT-PCR检测胆汁淤积性肝损伤相关基因的表达水平。结果OA450、900和1350mg／kg组小鼠体重下降趋势明显；并使小

3、鼠肝指数上升；高剂量组(OA900和1350ms／kg)ALT、AST、T．BIL、D—BIL升高(成剂量依耐性)；病理检查发现，高剂量组小鼠肝细胞出现明显水肿、凋亡、坏死和羽毛样变性(胆汁淤积性肝损伤)；此外，高剂量组小鼠肝血红素氧化酶一1(HO一1)mRNA表达上升，而高剂量组小鼠肝细胞色素P4507a1(CYP7a1)、钠离子一牛磺胆酸共转运多肽(Ntcp)、有机阴离子转运多肽1b2(Oatplb2)、胆盐输出泵(Bsep)mRNA表达均减少。结论大剂量口服OA可致胆汁淤积性肝损伤，可能与影响胆

4、汁酸的生成与转运有关。【关键词】齐墩果酸；肝毒性；胆汁淤积齐墩果酸(oleanolicacid，OA)，为齐墩果酸烷型湿度50％～55％，明暗交替时间12／12h，自由摄水进五环三萜类化合物，是一种从植物中提取的天然产物，食。SPF动物使用合格证号：SYXK(黔)2011-004。实以游离或结合成苷的形式广泛存在于果蔬和中草药验前小鼠适应性喂养1周。中⋯，具有保肝、降脂、抗炎、抗过氧化等药理作用，是1．2主要试剂和仪器治疗急性黄胆型肝炎和慢性病毒性肝炎的口服非处方1．2．1试剂：齐墩果酸由贵阳制药厂提

5、供(纯度药物。但不少“保肝药”用之不当常引起肝毒性，其99％)；血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶过度反应可将“保肝”转变为“肝毒性”作用，有研究(AST)、总胆红素(T-BIL)、直接胆红素(D．BIL)生化表明：OA既有肝保护活性又有弱的肝毒性，长期过指标试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供；RNA量应用OA或含OA的中草药可产生胆汁淤积。纯化试剂盒由上海华舜生物技术有限公司提供；Power现代研究表明：胆汁淤积是由于胆汁形成、分泌、转运、SYBRGreenPCR(AppliedBiosy

6、stems)；HighCapacity排泄等代谢功能紊乱而引起。本实验旨在探讨多CDNAReVerseTranscriptionKits(AppliedBiosystems)；次口服OA所致胆汁淤积性肝损伤与胆汁的生成和转Trizol试剂由宝生物工程(大连)有限公司提供，其余运的关系，以期明确口服OA引起肝损伤的“剂量一效试剂均为分析纯。应”关系，这不但对安全、有效的应用OA来治疗疾病1．2．2仪器：实时定量RT-PCR扩增仪(美国Bio—Rad或作为保健食疗至关重要，而且对其他中药及其提取公司)，全

7、波长酶标仪(美国Thermo公司)，RNA逆转物引起肝毒性的机制也有借鉴作用。录仪(德国Eppendorf公司)，TU1810紫外分光光度仪(北京谱析仪器厂)，3K3型高速冷冻离心机(德国1材料与方法Sigma公司)，光学显微镜(德国Leica公司)。1．3方法1．1动物昆明种小鼠，雄性，10周龄，由重庆第三军医大大坪医院实验动物中心提供，动物许可证号：1．3．1实验分组及给药方法：25只小鼠，随机分成5组，即溶剂对照组、OA225、450、900和1350mg／kgCXK(渝)2007-0005，动

8、物饲养SPF级，温度20～22℃，组，每组5只，灌胃给药，1次／d，连续10d，溶剂为玉米油，溶剂对照组灌服等体积玉米油。基金项目：贵州省科技厅药物代谢动力学平台项目(黔科2008-002)贵1．3．2一般情况观察：给药期间每天记录小鼠体重、州省研究生创新基地(023)作者简介：万晓莉，硕士研究生，研究方向：药理代谢与毒理学。观察进食、饮水、毛色、活动、精神状态、大小便等。通讯作者：陆远富，教授，研究方向：药理代谢与毒理学。1．3．3血液样本采集和血生化