噬菌体AB3裂解酶的抗菌谱及其抗菌机制-论文.pdf

《噬菌体AB3裂解酶的抗菌谱及其抗菌机制-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、第36卷第2期世界科技研究与发展VoI．36No．22014年4月142—145页WOIlLDSCI．TECHR&DApr．2014PP．142—145噬菌体AB3裂解酶的抗茵谱及其抗菌机制木张劫李秀娟～陈永(1．重庆市第三人民医院老年科，重庆400014；2．重庆医科大学附属第一医院一分院内科，重庆400015)摘要：目的明确噬茵体AB3裂解酶LysAB3的抗茵谱及其抗茵机制。方法利用扩散法检测裂解酶LysAB3的抗茵谱；扩增裂解酶LysAB3基因序列前端的354bp，以pET28a(+)为载体构建重组质粒，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，Ni“一NTA亲和层析柱纯化重组蛋白，得

2、到删除了两性多肽结构的裂解酶LysAB3-D，并测定其抗菌率。结果裂解酶LysAB3可以裂解全部4O株鲍曼不动杆菌菌株；删除了两性多肽结构后，裂解酶LysAB3一D的抗菌率由95．8％下降至33．3％。结论裂解酶LysAB3的抗菌谱较宽；其杀茵机制可能是通过其两性多肽结构增加细菌外膜通透性，辅助酶解催化域进入其中降解肽聚糖。关键词：噬茵体；裂解酶；抗茵谱；抗菌机制中图分类号：Q939文献标识码：Adoi：10．3969／j．issn．1006—6055．2014．02．012AntibacterialSpectrumandAntibacterialMechanismofBacterio

3、phageAB3EndolysinZHANGJieLIXiujuan·CHENYong(1．DepartmentofGeriatricsMedicine，TheThirdPeople’SHospitalofChongqing，Chongqing400014；2．DepartmentofInternalMedicine，TheFirstBrand，TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400015)Abstract：ObjectiveToinvestigatetheantibacterialspec

4、trumandantibacterialmechanismofLysAB3．MethodThegeldif-fusionassayisutilizedtodeterminetheantibacterialspectrumofLysAB3．Therecombinantplasmidisconstructedbyinser—ting354bpinfrontofLysAB3geneintothevectorpET28a(+)．AfterexpressioninE．coliBL21(DE3)andpurificationwithNi一NTAsepharose，LysAB3一Disacquire

5、dwithlackofamphiphilicpeptidesstructure，withtheantibacterialactivitydetermined．ResultsThegeldiffusionassayshowedthatLysAB3hadbactericidaleffectsagainst40strainsofAcinetobacterBaumannii．Aftertheamphiphilicpeptidesstructurewasdeleted，theantibacterialactivityofLysAB3-Ddroppedfrom95．8％to33．3％．Conclu

6、sionTheseresultsindicatethattheantibacterialspectrumofLysAB3isabroadrelativelyandtheaul—phiphilicpeptidesstructureofLysAB3increasepermeabilityofbacterialoutermembrane，whichhelpstheenzymaticcatalyticdomaindegradethepeptidoglyean．Keywords：bacteriophage；endolysin；antibacterialspectrum；antibacterial

7、mechanism的高通透性，有助于裂解酶进入其中裂解细菌。本1引言研究主要通过表达缺少两性多肽结构的裂解酶蛋白裂解酶是双链DNA噬菌体编码的、并于基因组LysAB3-D，观察其抗菌率的变化，进而阐明裂解酶复制晚期合成的一种酶，通过降解细胞壁的主要成可能的抗菌机制。分肽聚糖，破坏细菌完整性，达到抗菌目的。既往对2材料与方法裂解酶的研究主要集中在革兰阳性菌上，很少应用于革兰阴性菌。这是因为后者外膜的低通透性限制2．1主要菌株及试剂了裂解酶的杀菌能