ERp57在非酒精性脂肪肝中的作用-论文.pdf

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1、第48卷第2期哈尔滨医科大学学报V01．48．No．22014年4月JOURNALOFHARBINMEDICALUNIVERSrIYApr．，2014119ERp57在非酒精性脂肪肝中的作用王辉，项夏霖，刘填桂，王苑芳(广东省生物技术候选药物研究重点实验室，广东药学院生命科学与生物制药学院，广东广州510006)[摘要]目的探讨蛋白二硫化物异构酶g3(ERp57)在非酒精性脂肪肝病中的作用。方法用1mmol／L脂肪酸混合物(油酸／软脂酸比例为2：1)作用于人肝细胞L02构建脂肪肝细胞模型，采用RNA干扰技术在脂肪肝模型中抑制E

2、Rp57表达。流式细胞仪和荧光显微镜观察抑制ERp57表达后肝细胞脂质堆积情况，流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况，Westernblot技术检测脂代谢相关蛋白固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1)表达情况。结暴Westernblot显示，ERp57siRNA转染L02细胞有效抑制了ERp57表达，减少了L02细胞内脂质堆积，但对脂肪酸混合物诱导的肝细胞凋亡无明显影响。与对照siRNA转染组相比，ERp57siRNA转染组肝细胞的SREBP一1蛋白表达下调。结论抑制ERp57表达通过调节脂代谢相关蛋白SREBP．1减少L02细胞内脂

3、质堆积。[关键词]蛋白二硫化物异构酶A3；非酒精性脂肪肝病；脂肪堆积；固醇调节元件结合蛋白．1[中图分类号]R575．5[文献标识码]A[文章编号]1000—1905(2014)02一Ol19—05RoleofERp57innonalcoholicfattyliverdiseaseWANGHui，XIANGXia—lin，LIUTian-gui，WANGYuan—fang(GuangdongProvinceKeyLaboratoryofBiotechnologyDrugCandidates，SchoolofBioscience

4、sandBiopharmaceutics，GuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006，China)Abstract：ObjectiveToinvestigatetheroleofproteindisulfide—isomeraseA3(ERp57)innonalcoholicfattyliverdisease(NAFLD)．MethodsNAFLDcellmodelwasinducedbyin—cubatinganormalhumanhepatocytes—derived

5、celllineL02with1mmol／Lfreefattyacids(FFAs)mixture(oleateandpalmitate，2：1)．InvolvementofERp57proteininsteatosiswascharacterizedusingtheRNAinterferenceapproachwiththesteatoticcells．Cellulartotallipid．accumulationwasdeterminedafterNileRedstainingbyfluorescencemicroscop

6、eandflowcy—tometry．LipotoxiceffectswereevaluatedbyAnnexinv／PIstaining．Theexpressionoflipidmetabolismrelatedproteinsterolregulatoryelementbindingprotein1(SREBP-1)wasexam—inedbyWesternblotanalysis．ResultsInthesteatoticcells，knockdownofERp57expressionwithsiRNAdidnottri

7、ggerapparentapoptosisbutsignificantlyreducedfataccumulation．West_emblotanalysisshowedthattheexpressionofSREBP．1wasdown—regulatedinERp57siRNA-trasfectedcellscomparedwithcontrolsiRNA—trasfectedcells．ConclusionKnockdownofERp57alleviatedhepaticsteatosisinL02cellsbydown—

8、regulatingtheexpressionofSREBP一1protein．Keywords：ERp57；nonalcoholicfattyliverdisease；lipidaccumulation；SREBP一1[收稿日期]2014-01—14[基金项目]国家自然科学