多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质的调节-论文.pdf

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Apr：49(4)·427·多聚左旋精氨酸对NCI-H292细胞炎症介质的调节唐伟，范晓云，陆兆双，霍龙摘要目的研究多聚左旋精氨酸(PLA)对NCI—H292细胞参与AHR。作为ECP的类似物，多聚左旋精氨酸分泌白细胞介素(IL)-6、IL一8、IL一13、嗜酸性粒细胞趋化因子(poly·L—arginine，PIA)具有与ECP相似的生物学活(Eotaxin)的影响。方法将NCI—H292细胞分为对照组(培性。该实验旨在通过气道上皮细

2、胞来研究PLA在养液)、脂多糖(LPS)组(5m1)、PLA组(Max=40t'g／气道炎症反应中的作用以及肝素对其影响。m1)、LPS+PLA组、LPS+PLA+肝素组。采用ELISA法检测各组IL-6、IL一8、IL一13、Eotaxin的水平，并比较各组间的差异。1材料与方法结果LPS+PLA组IL-6、IL一8、Eotaxin的水平明显高于对照1．1细胞来源上皮细胞系NCI—H292是一种人组、LPS组、PLA组(P<0．05)，而LPS组、PLA组与对照组比较，IL-6、IL一8、Eotaxin的水平差异无统计学意

3、义(P>0．05)；肺腺癌细胞系，属于肺泡Ⅱ型上皮细胞，单层贴壁生各组IL-13的水平差异无统计学意义(P>0．05)；而肝素能长，购自美国ATCC公司。够降低LPS+PLA组IL-6、IL一8、Eotaxin的水平(P<0．05)。1．2主要试剂脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)、结论PLA促进LPS诱导NCI—H292细胞IL-6、IL8、EotaxinPLA均购自美国Sigma公司；肝素购自江苏万邦生的表达，但肝素可抑制其表达；而PLA对IL一13的表达没有化医药公司；胎牛血清、RPMI1640购自

4、美国Gibco影响。．公司；ELISA(IL一6、IL一8、IL-13、Eotaxin)试剂盒购自关键词哮喘；多聚左旋精氨酸；白细胞介素-6；白细胞介上海森雄公司。素一8；白细胞介素一13；嗜酸性粒细胞趋化因子；肝素1．3细胞培养NCI—H292细胞在常规培养基中图分类号R256．12(RPMI1640+10％胎牛血清+100U／ml青霉素+文献标志码A文章编号1000—1492(2014)04—0427—04100g／ml链霉素)中培养，37℃含5％CO培养箱中孵育，当细胞长至70％～80％时开始传代，每支气管哮喘是一种以

5、多种炎性细胞浸润及气道周传代2次，用于后续试验。高反应为特征的可逆性气道阻塞性疾病，其中嗜1．4ELISA法检测细胞因子IL-6、IL-8、Eotaxin、酸性粒细胞(eosinophil，Eos)在气道黏膜的浸润是IL一13的表达准备一定量的NCI-H292细胞过夜，以哮喘为主要特征。在患者支气管活检组织、肺泡在加入刺激物之前，用不含血清的RPMI1640再洗灌洗液和外周血中均发现活化的Eos，其活化后释1次，以去除内源性细胞因子和排除血清的影响，放的颗粒主要是嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosino—以不加任何刺激物的细胞作

6、为阴性对照，依照试验philcationicprotein，ECP)，而在支气管哮喘气道高设计加入LPS(5g／m1)、PLA(Max=40g／m1)、肝反应性(airwayhyperresponsiveness，AHR)的病理过素(100U／m1)，37℃孵育20h后，收集上清液，采程中，上皮细胞起着重要作用。ECP通过改变上皮用ELISA法分别检测各组IL一6、IL一8、Eotaxin、IL一13细胞功能或直接细胞毒作用而影响气道上皮细胞，的水平。释放多种细胞因子如：白细胞介素(interleukin，IL)-1．5统计

7、学处理采用SPSS16．0统计软件分析，6、IL．8、IL一13、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)等数据以x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析(one．wayANOVA)；两两比较方差齐时采用LSD2013—12—12接收基金项目：国家自然科学基金青年科学基金(编号：8l100027)；安徽检验，方差不齐时采用Dunnett’ST3检验。省高校省级自然科学研究项目(编号：KJ2011A176)；安徽医科大学第一附属医院博士启动基金；安徽省人社厅第九2结果批学术和技术带头人及后备人选学术科研活动资助2．1PLA在LP

8、S刺激后增加IL-6、IL-8的释放作者单位：安徽医科大学第一附属医院老年呼吸内科，合肥230022作者简介：唐伟，女，硕士研究生；一定浓度的PLA(5～20g／m1)明显促进LPS诱导范晓云，女，副教授，副主任医师，硕士生导师，责任作者，的NCI—H292细胞IL-6、IL．8的水平(P