hTERT基因多态性与食管癌的相关性.pdf

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1、·614·临床检验杂志2012年8月第3O卷第8期ChinJClinLabSci，Aug．2012，Vo1．30，No．8文章编号：1001_764x(2012)08-614_03。研究生园地·hTERT基因多态性与食管癌的相关性马少君，刘超，顾海勇，唐巍峰，董长青，丁国文，陈锁成(江苏大学附属人民医院胸外科，江苏镇江212000)摘要：目的研究中国汉族人群中人端粒酶逆转录酶(humantelomerase—reversetranscriptase，hTERT)基因多态性与食管癌发生危险的关系。方法用高分辨率熔解曲线(highr

2、esolutionmelting，HRM)法分析384例食管癌和384例非肿瘤患者hTERT基因多态性，计算各种基因型的食管癌发生风险及其95％可信区间(CI)并进行遗传平衡检验。结果hTERTrs2735940C>T3种基因型CC、CT、TT在食管癌组和非肿瘤组的频率分别为41．O％(CC)、44．1％(CT)、14．9％(TT)和37．0％(CC)、45．9％(CT)、17．1％(TT)。与CC基因型个体相比较，TT型与食管癌的发病风险无明显相关(调整OR=0．79，95％CI=0．52～1．21)。结论hTERTrs273

3、5940C>T基因多态性可能不是食管癌发生的易感因素。关键词：人端粒酶逆转录酶；食管癌；高分辨率熔解曲线；单核苷酸多态性中图分类号：R735．1文献标志码：A食管癌是常见的消化道恶性肿瘤，在消化道肿HRM分析仪(美国Idaho公司)，超低温冰箱(日本瘤中发病率仅次于胃癌。目前认为，食管癌的发生、三洋公司)，台式离心机(上海医用分析仪器厂)，发展是环境与遗传因素共同作用的结果。其危险因iCyclerPCR扩增仪(BioRad公司)。素主要为暴露于致癌环境、不良饮食习惯及微量元1．3标本收集在获得书面的知情同意书后，对食素缺乏等。但

4、不同遗传背景的个体，在相同的危险管癌患者及非肿瘤患者均使用特定的调查表进行问因素暴露下发生食管癌的危险性不同，提示遗传背卷调查，采集全部研究对象的晨起空腹静脉血2mL景的差异影响了个体癌症的易感性。有研究表EDTA抗凝，1h内4000r／min离心10min，分离白细明¨，hTERT基因转录起始点上游-1327位点处存胞层，分装于1．5mLEP管，一40℃保存。在C／T多态性位点，能引起hTERT基因表达变异，1．4基因组DNA提取按QiagenDNA提取试剂盒是非小细胞肺癌发生的潜在危险因素。但在食管癌说明书操作提取各组标本的

5、基因组DNA，4保存。中鲜有报道。本研究通过用高分辨率熔解曲线1．5引物设计与PCR反应用LightscannerPrimer(HRM)小片段扩增子技术检测hTERTrs2735940CDesignSoftware设计hTERT基因多态性位点>T基因多态性并分析其与食管癌的相关性。(rs2735940)的引物，并用PrimerPremier5．0软件进行验证。hTERTrs2735940上游引物：5．AGAGACA1材料与方法ATTCACAAACACAGC一3；下游引物：5．GCCTCGTCT1．1研究对象收集2008年l0月至

6、2009年11TGTAAATACTFAGGA一3，扩增片段长度为100bp。月在江苏大学附属人民医院胸外科、江苏大学附属PCR反应总体系为20，包括50ng基因组DNA，医院胸外科行食管癌根治术的食管癌患者384例，12．5pmol上、下游引物，0．1mmol／LdNTP，1×均经内镜活检或手术切除组织病理学检查确诊并证PCRbuffer(50mmol／LKC1，10mmol／LTris—HC1和实为鳞状细胞癌。收集同期非肿瘤患者(主要为外0．1％TritonX一100)，1．8mmol／LMgC12和1．0U伤及感染性疾病)3

7、84例。所有对象来自江苏省镇Taq酶，1×LCGreenPlus。反应体系中加入20L江市及其周边地区，均为汉族人群，两组年龄、性别矿物油，防止挥发。循环参数：95cC预变性5min；差异均无显著性(P>0．05)。94cI=30S，57oC30S，72oC30S，共35个循环；721．2试剂及仪器DNA提取试剂盒(Qiagen公℃延伸5min。司)，Taq酶及其配套试剂(Promega公司)，LC1．6HRM分析扩增产物经3000r／min离心2GreenPlus饱和荧光染料(美国Idaho公司)，矿物油min。按7300Li

8、ghtScannerHRM分析仪说明书操(Sigma公司)，PCRbuffer、PCRMastermix(ABI公作进行分析，从65℃开始，以0．1℃／s的斜率采集司)、异丙醇及75％乙醇(天津北方化学试剂公司)，熔解曲线，到96℃结束，用LightScanne