2015年临床医学检验主管技师职称考试考点点评

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1、2015年临床医学检验主管技师职称考试考点点评　　临床医学检验主管技师职称考试的知识点和考试内容，小张老师通过本文梳理出部分的考点知识如下，供广大考生参考复习。　　一、血糖测定缩合法　　为有机化学法，利用芳香胺类在酸性环境中可与葡萄糖醛基缩合成葡萄糖基胺，再脱水、结构重排，生成有色物质。　　其中邻甲苯胺法在临床上曾广泛使用。缩合法采用单一试剂显色，操作简便，可以直接用血浆或血清进行测定，灵敏度高，特异性较氧化还原法高，故测定结果与真糖值接近。本法的主要缺点是试剂腐蚀性大，有致癌性，既有害于健康又易损坏仪器。　　应注意以

2、上非酶法均为非特异性方法，由于非糖还原物质，如谷胱甘肽，维生素C.肌酐、肌酸、尿酸等也都能参与反应，可使结果比酶法偏高0.3～0.6mmol/L。　　二、B细胞增殖能力试验　　（一）不同刺激物诱发增殖试验　　抗IgM抗体和细菌脂多糖均能刺激B细胞增殖，培养1～3天以后，加3H-TdR，与淋巴细胞增殖试验一样，检测细胞内cpm，计算促有丝分裂原对淋巴细胞的刺激指数。也可用台盼蓝法计细胞增殖或用DNA特异性染色观察胞内DNA或RNA的分化程度。　　（二）葡萄球菌诱导试验　　葡萄球菌CowenⅠ株（SAC）表面富含SPA.该

3、试验不依赖T细胞的参与，操作原则是将SAC与淋巴细胞按一定比例混合，按增殖试验法同样操作和计数cmp值。葡萄球菌表面SPA含量与激发B细胞转化能力成正比。　　三、溶血空斑形成的试验　　经典的溶血斑试验用于检测实验动物抗体形成细胞的功能，其原理是将绵羊红细胞（SRBC）免疫小鼠，4天后取出脾细胞，加入SRBC及补体，混合在温热的琼脂溶液中，浇在平皿内或玻片上，使成一蒲层，置37温育。　　由于脾细胞内的抗体生成细胞可释放抗SRBC抗体，使其周围的SRBC致敏，在补体参与下导致SRBC溶血，形成一个肉眼可见的圆形透明溶血区而

4、成为溶血空斑（plaque）。每一个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。　　这种直接法所测至的细胞为IgM生成细胞，其它类型Ig由于溶血效应较低，不能直接检测，可用间接检测法，即在小鼠脾细胞和SRBC混合时，再加抗鼠Ig抗体（如兔抗鼠Ig），使抗体生成细胞所产生的IgG或IgA与抗Ig抗体结合成复合物，此时能活化补体导致溶血，称间接空斑试验。　　但是上述直接和间接空斑形成试验都只能检测抗红细胞抗体的产生细胞，而且需要事先免疫，难以检测人类的抗体产生情况。如果用一定方法将SRBC用其它抗原包

5、被，则可检查与该抗原相应的抗体产生细胞，这种非红细胞抗体溶血空斑试验称为空斑形成试验，它的应用范围较大。　　现在常用的为SPA-SRBC溶血空斑试验。SPA能与人及多数哺乳动物IgG的Fc段呈非特异性结合，利用这一特征，首先将SPA包被SRBC，然后进行溶血空斑测定，可提高敏感度和应用范围。在该测试系统中，加入抗人Ig抗体，可与受检细胞产生的免疫球蛋白结合形成复合物，复合物上的Fc段可与连接在SRBC上的SPA结合，同时激活补体，使SRBC溶解形成空斑。　　此法可用于检测人类外周血中的IgG产生细胞，与抗体的特异性无关

6、。用抗IgA.IgG或IgM抗体包被SRBC，可测定相应免疫球蛋白的产生细胞，这种试验称为反相空斑形成试验。　　溶血空斑形成试验可用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响，或评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的功能。　　四、造血生长因子检测　　在造血生长因子的检测方法中，生物活性检测法最为基础，具体方法有以下几种：　　1.集落刺激法CSF在体外可以刺激骨髓细胞增殖，形成造血细胞集落，集落的多少与CSF的生物学活性成正比。　　2.细胞增殖法CSF的依赖株很多，如GN-CSF的依赖细胞株是DA3.15，M-CSF依赖

7、细胞株是M14，G-CSF依赖株是NES60.4，待测样品与相应细胞株共同培养后，用3H-TdR掺入法或MTT法测定，根据依赖株细胞的增殖情况，检测不同CSF的生物活性。　　此外，也可用免疫学检测法和分子生物学检测法，其检测原理与检测其它细胞因子基本相同。