TAT-tCNTF对CD损伤细胞的作用机制研究.pdf

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1、中国药物应用与监测2014年6月第11卷第3期ChineseJournalofDrugApplicationandMonitoring，Vo1．11，No．3，June2014·实验研究·TAT-tCNTF对CD损伤细胞的作用机制研究张宏，张琴，刘泽源，徐亚飞，曲恒燕(军事医学科学院附属医院，北京100071)I摘要】目的：探讨TAT-tCNTF对细胞松弛素D(CD)导致的人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)损伤的作用机制。方法：TAT-tCNTF处理经CD损伤的细胞，CCK-8法检测其对细胞活力的影响；荧光显微镜观察罗丹明．鬼笔环肽标记的F-actin的变化；荧光显微镜和流

2、式细胞术(FCM)检测细胞内Fluo4-AM标记的Ca2+浓度变化；Westernblot检测F．actin蛋白水平变化。结果：10I．tmol·LCD降低HUVECs的细胞活动度(P<0．0001)，而10·mL的TAT-tCNTF明显升高HUVECs的细胞活动度(P=0．003)；荧光显微镜下观察到CD作用后的细胞F．actin断裂且分布减少，而TAT-tCNTF可改善这一现象；TAT-tCNTF可降低由CD引起的细胞内Ca2超载；FCM显示CD组Ca2+荧光强度(MFI)较对照组增强，而(CD+TAT-tCNTF)组的MFI较CD组减弱。Westernblot结果显示

3、各组F．actin表达量无明显差异。结论：TAT-tCNTF对CD引起的细胞损伤有改善作用，其机制与维持细胞骨架结构和缓解细胞内Ca2超载有关。【关键词1TAtCNTF；细胞松弛素D；F．actin；Ca2超载【中图分类号11065【文献标识码lA【文章编号】1672—8157(2014)03—0145—04StudiesofthemechanismofTAT-tCNTFoncellinjurycausedbycytochalasinDZHANGHong，ZHANGQin，LIUZe—yuan，XUYa-fei，QUHeng-yan(A~liatedHospitalofAc

4、ademyofMilitaryMedicalSciencesBeijing100071，China)【ABSTRACT】Objective：ToinvestigatethemechanismofTAT-tCNTFonhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)i~uredbycytochalasinD(cD)．Methods：AfterHUVECsweretreatedwithCDandTAT-tCNTF,cellviabilitywasdeterminedbyCCK-8．ThestructuralchangesofF—actinst

5、ainedbyrhodaminelabeledghostcyclicpeptidewereobservedthroughthefluorescencemicroscope．ConcentrationsofintracellularfreecalciumbyFluo4-AMloadingweredetectedthroughthefluorescencemicroscopeandflowcytometry．WesternblotwasusedtodetecttheexpressionofF-actinprotein．Results：CD(10~tmol·L。1reducedt

6、hecellviabilityofHUVECs<0．0001)，whileTAT-tCNTF(10g‘mL。。)significantlyincreasedthecellviabilityofHUVECs(尸=O．003)．F-actinwithCDwasfracturedandreduced，whileitwasimprovedaftersubsequenttreatmentwithTAT-tCNTF．TAT-tCNTFalleviatedthecalciumoverloadcausedbyCD．Flowcytometryshowedmeanfluorescenceint

7、ensity(MFI)ofCainCDgroupwasstrongerthanthatincontrolgroup，theMFIofCain(CD+TAT-tCNTF)groupwaslowerthanthatinCDgroup．WesternblotshowedtheexpressionofF-actinproteinhadalmostnochangeamongallgroups．Conelusion：TAT-tCNTFamelioratedthecellinjurycausedbyCD．Themechanism