与HIV-1共感染的HHV-6毒株的分离、传代培养与鉴定.pdf

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1、军事医学科学院院刊2006年8月第30卷第4期310BuIIAcadMiIMedSci，Aug2006；VoI30No4与HIV-1共感染的HHV-6毒株的分离、传代培养与鉴定李珏，鲍作义，董华凰，刘思扬，庄道民，李韩平，李豫川，李敬云（军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071）［摘要］目的：对一株从中国河南省一名艾滋病患者体内分离的、可在MT4细胞上稳定传代的未知病毒29A进行鉴定，确定该病毒种类及型别。方法：用从该患者外周血单核细胞中分离的病毒株感染MT4细胞，获得可在该细胞上稳定传代的病毒株29A。通过细胞病变特征、电镜观察结果、HIV-1

2、p24抗原检测以及HIV-1poI区基因扩增结果，对该毒株是否为HIV-1进行鉴别。在电镜下对病毒感染细胞的超薄切片进行观察，发现该病毒呈现疱疹病毒形态特征，因此设计人类疱疹病毒6型（HHV-6）U69、U16/U17、U60/U66三个不同基因片段的特异性引物并进行巢式PCR扩增，对扩增产物进行序列测定和结果分析。结果：该毒株HIV-1p24抗原检测为阴性；用HIV-1poI区特异性引物未扩增出目的片段；细胞病变形态不同于HIV-1引起的病变；电镜观察该病毒直径为160~200nm，明显大于HIV-1，表明该传代株不是HIV-1。用人类疱疹病毒6型（HHV-6）U69、U16/U17、U

3、60/U66等基因的特异性引物均扩增出了目的片段，序列分析的结果表明该毒株为HHV-6病毒B亚型。结论：在国内首次从艾滋病患者的外周血淋巴细胞中分离出HHV-6，为进一步研究HHV-6和HIV-1的相互作用奠定了基础。［关键词］HIV-1；HHV-6；共感染；传代；鉴定［中图分类号］R512.91［文献标识码］A［文章编号］1000-5501（2006）04-0310-05Isolation，passageandidentificationofHHV-6co-infectedwithHIV-1LIJue，BAOZuo-yi，DONGHua-Huang，LIUSi-yang，ZHUANGDa

4、o-min，LIHan-ping，LIyu-chuan，LIJing-yun（StateKeyLaboratoryofPathogenandBiosecurity，InstituteofMicrobioIogyandEpidemioIogy，AcademyofMiIitaryMedi-caISciences，Beijing100071，China）［Abstract］Objective：ToidentifyandcharacterizeanunknownviraIstrain29A，whichwasisoIatedfromtheperipheraIbIoodIymphocytesofanA

5、IDSpatientfromHenanProvinceofChinaandwasabIetopassageinMT4.Methods：ThevirusstrainwasisoIatedfromtheperipheraIbIoodIymphocytesofanAIDSpatient.TheprimaryisoIatedstrainwasusedtoinfecthumantransformedT-ceIIIinesMT4，andastabIepassagestrain29Awasgained.TheCPE（cytopathiceffect）observation，eIectronmicrosc

6、opicexamination，HIV-1p24antigentestandnested-PCR（nPCR）withHIV-1poIgeneprimerswereper-formedtodeterminewhether29AwasHIV-1.ThesevirusesexhibitedacharacteristicherpesvirusmorphoIogy，sonPCRwasperformedtoampIifyHHV-6U69，U16/U17，U60/U66genes.Results：p24Antigenwasnegativeinthestrain29A，poIgeneofHIV-1wasn

7、otampIified，andthecharacteristicsofCPEweredifferentfromthoseofHIV-1.Thediameterofthisvi-rusparticIewasabout160-200nm，apparentIybiggerthanthatofHIV-1.Sothestrain29AwasnotconsideredasHIV-1.nPCRwasperformedwithHHV-6