人高迁移率族蛋白1基因的克隆和表达.pdf

《人高迁移率族蛋白1基因的克隆和表达.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、232·研究原著·文章编号：1000-279（02003）03-0232-03人高迁移率族蛋白1基因的克隆和表达别良峰，于文彬，程晓东，苏明权，刘家云（第四军医大学西京医院临床分子生物学研究中心，陕西西安710033）!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!Cloningandexpressionofthehuman0引言高迁移率族蛋白（1HMG-1）系由于它在凝胶电泳highmobilitygroup-1proteincodegene中迁移速度快的特征而得名，它是与染

2、色体结合的非BIELiang-feng，YUWen-Bin，CHENCXiao-dong，SUMing-12组蛋白成分之一.该蛋白基因定位于人染色体12gOuan，LIUJia-Yun带，由215个氨基酸组成.HMG-1在哺乳动物中是一CentreofCIinicaIMoIecuIarBioIogy，XijingHospitaI，FourthMiIitary个高度保守的序列，它与DNA结合，可稳定核小体形MedicaIUniversity，Xian710033，China状，作为基因和组织特异性的转录调控因子有调节转录活性的作用［1］.最近细胞外的HMG-1

3、被确认为是【Abstract】AIM：ToclonehumanHMG-1codegene，construct［2，3］介导迟发性内毒素致死性休克的“晚期”介质，已therecombinantvectorandexpressitsproducts.METHODS：证实该蛋白在生物学作用和生成的动力学特点与其HumanHMG-1codegenewasamplifiedbyRT-PCRfromhu-他致炎症因子如肿瘤坏死因子、IL1等明显不同，而manprimaryperipheralbloodmononuclearcellsandclonedintovector

4、pGEM-T.Afterseguenced，itwassubclonedinto且对非内毒素耐受型和内毒素耐受型小鼠均有致死作用［2-4］prokaryoticexpressivevectorpGEX-4T-2.Havinginducedby.我们利用RT-PCR方法从人外周血单个核IPTGfor4h，theexpressionofrecombinant!r56000fusion细胞中扩增HMG-1基因，克隆入载体pGEMTeasy后，proteinGST-HMG1wasconfirmedbySDS-PAGE.RESULTS：再亚克隆入原核表达载体pGEX-

5、4T-2［5］，诱导该蛋白HumanHMG-1codegenewascloned.Expressedrecombinant的表达，为今后的深入研究其生物学功能打下基础.plasmidpGEX-HMG1wasconstructed.Theexpressedfusionproteinwasabout0.23oftotalbacterialproteinbygelthin-layerchromatographyscanning.CONCLUSION：ThehumanHMG-11材料和方法codegeneandprokaryoticexpressionproduct

6、sareobtained.It1.1材料人外周血单个核细胞由西京医院血库惠maybeofgreatsignificancetothestudyonthefunctionofhu-赠，大肠杆菌JM109，DH5!为本室保存，载体pGEX-manHMG-1andthepreparationofsomemonoclonalantibody4T-2为Pharmacia公司产品；质粒提取试剂盒和载体againsthumanHMG-1.【Keywords】highmobilitygroup-1protein；cloning；prokaryoticpGEM-Teasy为P

7、romega公司产品.TrizoI"试剂为expressionGibco公司产品；胶回收试剂盒为CIontech公司产品，各种限制性内切酶和TagDNA聚合酶、T4DNA连接【摘要】目的：克隆人高迁移率族蛋白（1HMG-1）编码基因，酶购自Promega公司.IPTG，X-gaI为TakaRa公司构建重组表达载体并对其诱导表达.方法：通过RT-PCR方法产品.扩增出人外周血单个核细胞中HMG-1的编码基因，克隆于载体pGEM-Teasy，测序分析后亚克隆于表达载体pGEX-4T-2，测1.方法根据HMG-1cDNAGenBank"（Accession序证实序

8、列正确后转化大肠杆菌DH5!，经IPTG诱导4h后可