医院制剂质量标准起草说明模版.doc

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1、191919193.6.4微生物限度3.6.4.1方法验证材料与依据3.6.4.11供试品：参榆灌肠液规格：XXX生产企业：江苏省XXX医院批号:3.6.4.1.2培养基：1．营养琼脂培养基批号：厂家：XXX192．玫瑰红钠琼脂培养基批号：厂家：XXX3．营养肉汤培养基批号：厂家：XXX4．胆盐乳糖培养基批号：厂家：XXX5．MUG培养基批号：厂家：XXX3.6.4.1.3稀释剂:pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液500ml/瓶,批号：(如缓冲液为市场购买，需写明生产企业)3.6.4.1.4菌种：菌种名称编号来源传代次数大肠埃希菌(E

2、scherichiacoli)CMCC（B）44102南京市药检所第3代金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CMCC（B）26003南京市药检所第3代铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)CMCC（B）10104南京市药检所第3代枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）CMCC（B）63501南京市药检所第3代白色念珠菌(Candidaalbicans)CMCC（F）98001南京市药检所第3代黑曲霉(Aspergillusniger)CMCC（F）98003南京市药检所第3代3.6

3、.4.1.5验证依据：《中国药典》2010年版二部附录XIJ微生物限度检查法方法验证。3.6.4.2验证实验操作根据《中国药典》2010年版二部附录微生物限度检查法方法，采用常规法（如常规法回收率未达70%，需采用培养基稀释法重新进行验证；如培养基稀释法回收率仍未达70%，可采用薄膜过滤法再次进行验证）对细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。控制菌检查方法采用常规法（若阳性未生长采用培养基稀释法或薄膜过滤法），从而建立该样品的微生物限度检查方法。3.6.4.2.1菌液制备方法：1.19接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假

4、单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,置350C培养24小时，分别取上述培养物1ml加9ml0.9％的无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，置250C培养48小时，取上述培养物1ml加9ml0.9％的无菌氯化钠溶液，10倍递增稀释制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液。3.接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中,置250C培养7天，加入5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％的无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，并吸出孢

5、子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％的无菌氯化钠制成每1ml含孢子数为50～100cfu的孢子悬液。3.6.4.2.2供试液制备：取供试品10ml,加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100ml,混均,作为1：10供试液。3.6.4.3菌落计数方法的验证3.6.4.3.1平皿法：（常规法）①试验组：取1：10供试液1ml，分别加入10个平皿中，再依次加入大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种菌的菌悬液1ml(含50～100cfu)，每株菌平行制备2个平皿，立刻倾注营养琼脂培

6、养基和玫瑰红钠琼脂培养基，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。②菌液组：分别取上述稀释的菌液1ml注入平皿内，每个菌平行制备2个平皿，测定所加的试验菌数。③供试品对照组：取1：10供试液1ml分别注入4个平皿中，立刻注入营养琼脂和玫瑰红钠琼脂培养基，每种培养基制备2个平皿，分别置350C培养48小时和250C培养72小时。以测定供试品的本底菌数。上述方法平行实验3次④结果见表1表1.参榆灌肠液细菌.霉菌和酵母菌回收率的测定（平皿法）菌种类型试验次数试验组菌液组供试品对照组回收率（%）试验组19大肠埃希菌14749095

7、.9265620100361560100金黄色葡萄球菌13633010024445097.8345410100枯草芽孢杆菌13842090.524750094.036267092.5白色念珠菌14548083.323539089.735055090.9黑曲霉13438089.522731087.132829096.6试验组菌回收率(%)＝由表1可见参榆灌肠液用平皿菌落计数法，三次平行试验大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌落回收都达到了70%，说明常规平皿法用于参榆灌肠液计数结果是准确的。备注：如采用常规

8、平皿法菌落回收率都达到70%，则细菌、霉菌和酵母菌的计数方法验证即可完成，但如常规法一种或几种菌回收率三次均低于70%，需采用培养基稀释法重新进行试验，具体操作如下：若细菌回收率低于70%则细菌数计数采用培养基稀释法，霉菌回收率低于7