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1、国际眼科纵览2006年2月第30卷第I期IntRevOphthalmol,February2006,Vol30,No.I·综述·印4亦匆晌燎杏件六眼丰惊痛价中的命田日J卫尘圳万}}-了六j土目民}M大夕内侈圳!甲rl}力竺川李学民王薇[摘要」印迹细胞法是近年来在临床上应用的一种简单、微创的眼表取材技术，该技术通过特殊的方式获取眼球表面的细胞样本，进行各种病理染色，帮助诊断眼表疾病。该技术不但可以对结膜鳞状上皮化生进行分期，而且可以对眼表复层鳞状__匕皮新生物、干眼症、角巩膜缘干细胞缺乏、眼表病毒感染、维生素A缺乏症、眼表过敏

2、性炎症、结膜色素痣和结膜恶性黑色素瘤等眼表疾病进行辅助诊断。本文对印迹细胞法的技术特点及其在眼科中的应用进行综述。【关键词】眼表疾病/诊断;印迹细胞法印迹细胞法是临床上一种简单、微创的眼表取眼球表面取样。并且这种生物膜在潮湿的情况下是材技术，该技术通过特殊的方式获取眼球表面的细透明的，更利于进行细胞学检查。胞样本，进行各种病理染色，帮助诊断眼表疾病。该二、印迹细胞检查法的技术技术的早期，主要用于眼表复层鳞状上皮新生物和(1)材料的选择:印迹细胞是一种取样的方法，干眼症的诊断[t,2?。目前印迹细胞除可以对结膜鳞所使用的材料可

3、以选择目前国际上广泛使用的生物状上皮化生进行分期，用于帮助诊断眼表复层鳞状膜和各种特殊处理的滤纸。(2)取样准备:在进行印上皮新生物和干眼症以外，还可以对角巩膜缘干细迹细胞检查之前，取样用的生物膜和各种特殊处理胞缺乏、眼表病毒感染、维生素A缺乏症、眼表过敏的滤纸都需要经过无菌处理。麻醉:取样前用普鲁性炎症、结膜色素痣和结膜恶性黑色素瘤等眼表疾卡因、丁卡因或利多卡因等麻醉剂对患眼进行表面病进行辅助诊断，并可以对局部使用药物如丝裂霉麻醉。(3)取样方法:将取样用的生物膜或各种特殊素C(mitomycinC,MMC)引发的眼表新生

4、物进行随处理的滤纸的豁附面紧紧贴附于取样处的眼球表访观察。面，直到生物膜变为半透明或滤纸变得潮湿为止。一、印迹细胞检查法的发展这一过程大约需要10-20秒。(4)标本的保存和处早在1954年法国人Larmande和Timsitl'j就首理:取下的潮湿的生物膜或滤纸需即刻放入95%酒次使用印迹细胞法对眼表复层鳞状上皮新生物进行精中固定，勿将生物膜自然风干。固定后将标本送诊断。1977年Egbert等[2丁首次使用醋酸纤维滤纸到实验室，进行各种处理及染色。也可以采取其他对干眼症患者取样进行印迹细胞法检查，自然风干特殊的处理方法，

5、如将滤纸的取样一面紧压在镀胶后行PAS染色，了解患者结膜杯状细胞的密度。这的载玻片上[sl或将滤纸的取样一面紧压在普通的载种取样方法患者一般没有痛苦，甚至可以不用麻醉。玻片上，再将二者一起放人甲醇、乙醇或丙酮中浸泡醋酸纤维滤纸取样一般可以得到角膜和结膜表面的处理[[6]。然后再对处理过的载玻片进行各种染色。1一3层细胞131。(5)染色方法:所取的样本可以进行H-E,PAS、免疫1992年以前，大多数印迹细胞检查都是使用各组化和免疫荧光等各种染色。对干眼症患者进行杯种特殊处理的醋酸纤维滤纸，使用各种容器送到实状细胞检查的最佳

6、方式是PAS染色。(6)观察方验室进行病理染色。随着印迹细胞检查法的发展，法:染色后用显微镜观察，对于使用不透明滤纸取得人们对此方法进行了许多改良。如Simon等〔‘〕采用的样本，可以通过显微镜直接观察或对样本进行特一种新型生物膜代替醋酸纤维滤纸收集眼表细胞进殊处理后再进行观察。行眼表疾病的诊断。这种新型生物膜是由生物膜和三、印迹细胞检查法的新进展圆筒型支架组成，性能稳定，豁附力强，可以直接在目前印迹细胞检查法采用很多新技术，如免疫组化染色对采集的标本进行检查，如对各种抗原的作者单位:100083北京大学眼科中心北京大学第三

7、医院眼科检查，包括病毒抗原和凋亡的检查。同时，印迹细胞国际眼科纵览2006年2月第30卷第1期IntRevOphthalmol,February2006,Vol30,No.1还被应用于流式细胞学、免疫荧光学等多种检查。膜上皮细胞较大，单个或成簇存在。(1)共聚焦显微镜:Pisella等[[71在球结膜印迹细胞取当OSSN侵犯眼表上皮细胞时，印迹细胞检查材的玻片上使用免疫荧光标记的抗体标记结膜的豁表现为细胞核增大、深染、形状不规则，有大量破碎蛋白，通过共聚焦显微镜观察发现豁蛋白存在于杯的染色质。在发生光损伤时，结膜和角巩膜缘上

8、皮状细胞的微小囊泡中。(2)流式细胞学:Baudouin的印迹细胞检查同样会发现鳞状上皮化生和眼表细等[181通过印迹细胞检查法取得眼表细胞，再进行转胞损伤的改变。OSSN发生上皮角化的概率远远高膜、离心，进一步进行流式细胞学检查，研究眼表的于子宫颈等处，因此在眼表发生鳞状上皮细胞癌的三种