人角膜内皮细胞株的建立与组织工程人角膜内皮的体外重建[1]

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1、DOI：CNKI:37-1389/N.20110901.1025.005第４６卷第１０期山东大学学报（理学版）２０１１年１０月Ｖｏｌ．４６Ｎｏ．１０ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ）Ｏｃｔ．２０１１文章编号：１６７１９３５２（２０１１）１０００００００人角膜内皮细胞株的建立与组织工程人角膜内皮的体外重建樊廷俊，马西亚，赵君，胡修忠（中国海洋大学角膜组织工程重点实验室，山东青岛２６６００３）摘要：为了体外重建出可用于角膜移植的组织工程人角膜内皮（

2、ＴＥＨＣＥ），本文从业已建立的非转染人角膜内皮（ＨＣＥ）细胞系中筛选出单克隆细胞株（ｍｃＨＣＥ），并以其为种子细胞对ＴＥＨＣＥ的体外重建进行了研究。经有限稀释法从非转染ＨＣＥ细胞系筛选出了ｍｃＨＣＥ细胞株，形态结构、染色体分析以及细胞连接蛋白和膜运输蛋白的检测结果显示，ｍｃＨＣＥ２４０１单克隆细胞株细胞具有正常而稳定的形态、结构和二倍染色体核型，并能表达细胞连接蛋白和膜运输蛋白，具有ＴＥＨＣＥ种子细胞的理想特征。以ｍｃＨＣＥ２４０１细胞为种子细胞、以去上皮层修饰羊膜（ｍｄＡＭ）为载体支架体外重建

3、出了ＴＥＨＣＥ，形态结构鉴定结果显示，多角形ｍｃＨＣＥ２４０１种子细胞在ｍｄＡＭ上形成了连续、完整的细胞单层，在细胞之间以及细胞与ｍｄＡＭ之间均形成了广泛的细胞连接，单层细胞密度高２达３６０２２２±４５２２个／ｍｍ（相当于０～３岁孩童ＨＣＥ的细胞密度），所重建单层角膜内皮的形态结构与在体ＨＣＥ高度近似。可见，本文成功建立了形态结构、核型以及功能蛋白表达正常的单克隆细胞株，并利用ｍｃＨＣＥ２４０１细胞和ｍｄＡＭ在体外成功重建出了形态结构与与在体ＨＣＥ高度近似的最“年轻”的ＴＥＨＣＥ，有望作为捐献

4、角膜内皮的等效替代物用于角膜内皮异常疾病的临床治疗。关键词：人角膜内皮细胞；单克隆细胞株；去上皮层修饰羊膜；组织工程人角膜内皮；重建中图分类号：Ｒ３１８／２７６７文献标志码：ＡＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｈｕｍａｎｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｔｒａｉｎａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａｔｉｓｓｕｅｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｈｕｍａｎｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍＦＡＮＴｉｎｇｊｕｎ，ＭＡＸｉｙａ，ＺＨＡＯＪｕｎ，ＨＵＸｉｕｚｈｏｎｇ（ＫｅｙＬａｂｏｒ

5、ａｔｏｒｙｆｏｒＣｏｒｎｅａｌＴｉｓｓｕｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＯｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６００３，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｉｓｓｕｅｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｈｕｍａｎｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ（ＴＥＨＣＥ）ｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｃｏｒｎｅａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｉｎｔｅｎｄｅｄｔｏｓｃｒｅｅｎｏｕｔｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｃｅｌｌｓｔｒａｉｎｓｆｒｏｍａｕｎｔｒａｎｓ

6、ｆｅｃｔｅｄｈｕｍａｎｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ（ＨＣＥ）ｃｅｌｌｌｉｎｅ，ａｎｄｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔＴＥＨＣＥｉｎｖｉｔｒｏｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｓｅｃｅｌｌｓａｓｓｅｅｄｅｒｃｅｌｌｓ．ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌｃｅｌｌｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔｆｒｏｍｔｈｅＨＣＥｃｅｌｌｌｉｎｅｂｙｌｉｍｉｔｄｉｌｕｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｅｘｐｒｅｓｓ

7、ｉｏｎｏｆｃｅｌｌｊｕｎｃｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｍｅｍｂｒａｎｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｅｌｌｓｆｒｏｍｍｃＨＣＥ２４０１ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｃｅｌｌｓｔｒａｉｎｓｈａｄｓｔｅａｄｙａｎｄｎｏｒｍａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｋａｒｙｏｔｙｐｅ，ａｎｄｐｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｌｊｕｎｃｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｍｅｍｂｒａｎｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｐｒｏｔｅｉｎｓａｓｗｅｌｌ．Ａｌｌｔｈｅｓｅｉｍｐｌｙｔｈａ

8、ｔｍｃＨＣＥ２４０１ｃｅｌｌｓｈａｖｅｉｄｅａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｓｅｅｄｅｒｃｅｌｌｓｆｏｒＴＥＨＣＥｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．ＢｙｕｓｉｎｇｍｃＨＣＥ２４０１ｃｅｌｌｓａｓｓｅｅｄｅｒｃｅｌｌｓ，ｍｏｄｉｆｉｅｄｄｅｎｕｄｅｄａｍｎｉｏｔｉｃｍｅｍｂｒａｎｅ（ｍｄＡＭ）ａｓｓｃａｆｆｏｌｄｃａｒｒｉｅｒ，ＴＥＨＣＥｗａｓｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｅｘａｍｉｎａｔ