d-荧光素活体操作手册

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1、D-荧光素钾盐/钠盐体内使用手册介绍2+荧光素是一种常用的荧光素酶表达的活体成像生物发光报告子。以ATP和Mg作为辅因子，有氧条件下荧火虫荧光素酶与水溶性底物反应发出一种特有的黄绿色发射光，在37℃活体内转换为红光。该反应通过消耗ATP来指示是否存在能量或生命的存在。D-荧光素在生物技术领域是一种常用的试剂，尤其在活体成像方面。荧光素酶被接种在研究动物中比如大鼠，小鼠，用来标记肿瘤细胞，干细胞或传染病。通过生物荧光成像这个模式系统中D-荧光素的注射可以用来实时，非侵入性监测疾病的进程或药物效率。产品具体信息D-荧光素钾盐4，5-Dihydro-2-(6-hydrox

2、y-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylicacidpotassiumsaltKC11H7N2O3S2分子量：318.42g/molD-荧光素钠盐4，5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylicacidsodiumsaltNaC11H7N2O3S2.H2O分子量：320.32g/mol储存：-20℃避光保存。材料D-荧光素盐荧光素钾盐（启维益成,G156410）荧光素钠盐（启维益成,G156411）2+2+DPBS(Dulbecco’sphosp

3、hate-bufferedsaline),withoutCa或MgSyringefilter,0.2um荧光素制备1.室温下融解D-荧光素（钾盐或钠盐）溶于DPBS(不含钙或镁)配成终浓度为15mg/ml。2.用5-10ml灭菌水预湿0.22um滤膜然后弃去灭菌水。3.通过准备好的0.22um注射器式滤膜灭菌荧光素溶液。4.按照不同的方法接种到实验室动物中（通常荧光素通过腹腔注射或静脉注射的方式接种到动物体内）。比如：按10ul荧光素储存液/g体重的比例来注射（正常情况下每20g小鼠注射200ul，标准150mg/kg注射）。5.成像之前等待10-20分钟可达到最

4、大荧光素酶信号稳定期。6.完成每个动物模型的荧光素酶动力学研究，以确定其信号达峰时间和平台期。确定动力学曲线每个动物模型和实验设计的组织生物分布的动力学是不同的，动物模型注射完荧光素后为了确定达峰信号时间，在实验之前建议先建立每个体系的动力学曲线。为您的动物模型的荧光素酶活性建立动力学曲线：1.通过以下推荐的每个所列方法（腹腔注射，静脉注射或皮下注射）注射荧光素。注射之前如果需要给动物镇静，注意这样可能使动力学曲线（荧光素酶达峰时间）稍稍延伸。根据给药途径不同荧光素的生物分布是不同的。2.对于腹腔（IP）或皮下（SQ）注射：a.如果你要注射荧光素时动物依旧是清醒的，

5、等待三分钟，然后根据您的方法选择（气体或注射麻醉）使其镇静。参看附录关于大鼠和小鼠麻醉剂/镇痛药物和剂量的使用。b.把已经使用镇静剂的动物放入成像室中，在注射荧光素后大约五分钟能看到荧光成像。3.对于静脉注射（IV）：a.立即对动物进行镇静（如果没有镇静）根据您的方法来选择（气体或注射麻醉）使其镇静。参看附录关于大鼠和小鼠麻醉剂/镇痛药物和剂量的使用。b.把已经使用镇静剂的动物放入成像室中，在注射荧光素后两分钟内能看到荧光成像。4.为建立荧光素酶表达的动力学曲线，对于腹腔（IP）或皮下（SQ）注射方法每隔5-10分钟拍摄一次成像时间可达40-60分钟（对于静脉注射（

6、IV）方法：每1-5分钟拍摄一次可达20-30分钟）。（大部分注射麻醉剂可持续20-30分钟，对于完整动力学曲线研究将需要额外的剂量！）5.对于您的动物模型从动力学曲线中选择最佳的成像时间点。大部分动物模型对于腹腔注射或皮下注射荧光素注入动物体内后大约10-20分钟达到信号峰值，对于静脉注射荧光素没注入后2-5分钟达到峰值。6.腹腔注射（IP）小鼠1.首先确定针的入口点。2.在膝关节的上部横跨腹部画一条想像的线。3.针应该沿着动物右侧这条线并贴近中间插入。（对于雌鼠，针的入口点位于最后一个乳头稍靠中间的部位。）4.针从小鼠的右侧插入避开盲肠，盲肠是腹部左侧一个大的充

7、满液体的器官。小肠（位于右侧）不大可能被针刺穿。5.针的插入从插入点离尾部或横向太远如上显示将是危险的，可能会注射到后腿里，这样将会造成肌肉组织受伤。6.为完成腹腔注射，必须很好地控制好小鼠以防在操作过程中移动。一旦针插入到腹部避免器官受损伤。7.控制好小鼠并倾斜以便使其头向下，腹部露出来。8.用70%乙醇对注射位点进行彻底消毒。9.对于腹部注射我们建议用25-27gauge直径的针，以30度角度插入腹部。10.针应插入大约半厘米（4-5mm）的深度。11.轻轻地吸出以确认针没有穿透血管，肠或膀胱。a.褐绿色吸出物表示针插进了小肠。b.黄色吸出物暗示针插进了膀胱