红细胞膜上各种磷脂中脂肪酸的测定

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1、分析化学研究报告红细胞膜上各种磷脂中脂肪酸的测定张抒峰’”常理文中国,北京科学院化学研究所摘耍应用自制硅胶板的薄层色谱法分离了红细胞膜上四种主要磷脂。将分离后的每种磷脂斑,不经萃取,一苯一乙酞氛溶液中进行转移甲基化,然后点硅胶涂层刮下直接在无水甲醇用毛细管气相色谱分离测定其脂肪酸组成和含量。上述方法已成功地用于先天愚型病人和,。正常人红细胞膜上各种磷脂中脂肪酸轮廓分析获得有意义的结果关镇词磷脂,脂肪酸,色谱分析,红细胞膜引百磷脂是生物膜的基本结构和功能物质。它的组成和含量决定了膜的通透性和流动性。磷,而脂酞链中不饱和键的增加会降低膜分子间排列的有序性和流动性随着卵

2、磷脂鞘磷·,。〔’’〕。脂比值降低其流动性也下降而膜的流动性将影响膜蛋白的构象与功能分析研究细胞膜上磷脂以及各种磷脂中脂肪酸疏水侧链有助于膜疾病分子机理的研究。红细胞膜上脂,〔,一二,〔‘〕肪酸分析方法已有很多报道大多是测定总脂中各种脂肪酸含量最近等报道了,一,用分离磷脂并收集磷脂各组份然后经方法甲酷化再用毛细管气相色谱。,,经乙分析我们采用自制薄板的方法分离磷脂将分离后的磷脂斑点刮下酞氯法直接将,,磷脂中脂肪酸进行转移甲基化再经毛细管气相色谱分析可以获得每种磷脂流水侧链脂肪酸,的种类和含量轮廓上述方法已成功地用于先天愚型病人和正常人红细胞膜上各种磷脂中脂肪酸和轮

3、廓分析,取得了有意义的结果。实验部分主要仪器与试剂,。,一型毛细管气相色谱仪装有检测器冷冻干燥机型低温高速离心机。积分仪。标准脂肪酸。。、,。、。。、,。,、。、。。、。、。‘、。,、,。、‘。均为美国。。,。,。,,公司产品及表示十六碳烷酸及表示有一双键的棕桐油酸依,,,次类推磷脂酞胆碱磷脂酞乙醇胺磷脂酞丝氨酸神经鞘磷脂均购自公司。实验方法样品的采集和红细胞膜磷脂的提取与制备取经北京市城区普查中确诊为先天愚型,一,,以改进的方法,二病人例岁和健康人例岁静脉血各一一一一收稿修改稿现在宁夏大学化学系工作©1994-2009ChinaAcademicJournalEl

4、ectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net第卷分析化,。制备红细胞膜红细胞膜中磷脂的提取用方法川进行最后将提取的混合磷脂溶拜一,,。解在中以备分析用。薄层板的制备与活化,称取工溶于含梭甲基纤维素钠的溶液中。将一硅胶青岛硅胶厂和上述溶液混合均匀后涂在预先洗净的玻璃板。,,。上又在室温下风干后置于一℃烘箱内活化即可使用磷脂组分的分离及各种磷脂中脂肪酸的甲基化将闪含磷脂的徉品液和磷脂标。。一乙,,准液点于同一板上采用两次展开方法第一次用己烷醚展开第二次用氛仿一一,。,〔甲醇水“展开分离好的薄

5、板用碘蒸气检出各磷脂组分斑点将这些乙烯盖的小反应瓶中,一,。斑点硅胶涂层分别刮入带有聚四氟加入甲醇苯和。,。叔乙酞氯密封后在℃反应川甲醋化产物用苯萃取浓缩后进行色谱分析一,毛细管气相色谱分析条件色谱柱键合石英毛细管柱义。,,液膜厚度。拜操作条件柱温起始温度℃维持以℃升温速率升温至,。,,℃保持汽化室温度,检测器温度℃载气氢气线速分流式,,。进徉分流比结果与讨论薄层色谱分离,,,磷脂的分离一般用硅胶板但这种板十分昂贵并且样品容量较小不适用于制备。本文采用自制的薄层板分离红细胞膜上磷脂类物质,可将中性脂和、、、,。磷脂满意地分离见图所示气相色谱分离,‘本文所采用的毛细

6、管气相色谱程序升温条件可以在内将一饱和与不饱和,见。长链脂肪酸甲醋全分离图口二〔代阵〕二‘,二尾合膜样膜样标乍笨一乙图红细胞膜上磷脂在自制硅胶板上图图标准脂肪酸甲酷分离图拜拌,,脂肪酸甲酩化的回收率取和经前述分离并进行甲醋化与。拌,。林和不经而直接进行甲酷化相对比其回收率列于表由回收率实验©1994-2009ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net分析化学第卷。,证实了该方法是可靠的由于磷脂中的不饱和脂肪酸在空气中易被氧化故经分离后得到的含

7、双键的脂肪酸回收率较低。共进行次测定。脂肪酸的定性分析一一一采用二根极性不同的毛细管柱表甲醉苯乙醉抓甲醋化回收率一,以文二和柱献方法计算标准脂肪酸脂肪成回收率写甲醋和每种磷脂中脂肪酸甲醋的保留指数相士,、。、,士对照结果列于表表从表可知红细‘二哆口,‘咨俘‘,。士胞膜磷脂中和中含有‘。、。。、士,、、。‘,长链脂肪酸而和均士。。。、。、。。、。、。士含有长链脂肪。。酸还含一表石英毛细管柱保留指数测定结果保留指致脂肪酸甲留标准脂肪酸甲幽样品样品样品样品。。。名‘舀妇几口曰,,目臼,弓公亏。一表石英毛细管柱保留指教侧定结果保留指数旨肪酸甲酸标准脂肪酸甲宙样品样品徉品样

8、品。。忍。