分子诊断常用技术50年的沿革与进步.pdf

《分子诊断常用技术50年的沿革与进步.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、·２０２·检验医学２０１４年３月第２９卷第３期ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｒｃｈ２０１４，Ｖｏｌ２９．Ｎｏ３．文章编号：１６７３８６４０（２０１４）０３０２０２０７中图分类号：Ｑ５０３文献标志码：ＢＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１４．０３．００２分子诊断常用技术５０年的沿革与进步吴之源，张晨，关明（复旦大学附属华山医院，上海２０００４０）摘要：分子诊断技术即是利用分子生物学方法对人类及病原体的各类遗传物质进行检测，以帮助对疾病进行诊断。自液相杂交

2、技术诞生以来，分子诊断已走过了５０年的历程。本文将以技术原理出发对分子诊断技术进行归类与评价，以对目前临床常用技术的沿革进行回顾，并从技术层面对分子诊断的未来进行展望。关键词：分子诊断；分子杂交；核酸序列；分子构想变异；聚合酶链反应Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｓｉｎｈａｌｆａｃｅｎｔｕｒｙ：ｔｈｅｃｏｕｒｓｅｏｆｃｈａｎｇｅａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｃｕｒｒｅｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓＷＵＺｈｉｙｕａｎ，ＺＨＡＮＧＣｈｅｎ，ＧＵＡＮＭｉｎｇ．（ＨｕａｓｈａｎＨｏｓ

3、ｐｉｔａｌ，ＦｕｄａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００４０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｕｓｅｓｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｃｉｄｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｏｆｈｕｍｅｎｏｒｐａｔｈｏｇｅｎｓ，ａｎｄｔｏａｓｓｉｓｔｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｓｉｎｃｅｔｈｅｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｏｆｌｉｑｕｉｄｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ｍｏ

4、ｌｅｃｕｌａｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓｈａｓｗｉｔｎｅｓｓｉｔｓｒａｐｉｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｆｏｒｏｖｅｒｈａｌｆａｃｅｎｔｕｒｙ．Ｈｅｒｅｗｅｗｉｌｌａｓｓｏｒｔｔｈｅｃｏｍｍｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｉｒｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｏｒｉｇｉｎｓ，ｓｏａｓｔｏｒｅｖｉｅｗｔｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｃｕｒｒｅｎｔｃｌｉｎｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ａｎｄｔｏｇｅｔａｔｅｃｈｎｉｃａｌｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｏｎｔｈｅｄｅｖｅｌ

5、ｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｖａｒｉａｔｉｏｎ；Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ１９６１年Ｈａｌｌ建立的液相分子杂交法标志着（一）ＤＮＡ印迹技术（Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ）［１］人类掌握分子生物学技术对特定核酸序列进行检Ｓｏｕｔｈｅｒｎ于１９７５年发明了ＤＮＡ印迹技术，测

6、，开启了对疾病分子诊断的大门。１９８３年Ｍｕｌ通过限制性内切酶将ＤＮＡ片段化，再以凝胶电泳ｌｉｓ提出的聚合酶链反应（ＰＣＲ）概念，更是给分子将长度不等的ＤＮＡ片段进行分离，通过虹吸或电诊断技术插上了基因扩增的翅膀，大大提高了基压转印至醋酸纤维膜上，再使膜上的ＤＮＡ变性与因检测技术的敏感度与特异性，降低了分子诊断核素标记的寡核苷酸探针进行分子杂交，经洗脱的技术门槛。值此分子诊断迈过５０华诞之际，本后以放射自显影鉴别待测的ＤＮＡ片段探针间的文将按检测的原理对半个世纪中临床常用的分子同源序列。这一方

7、法由于同时具备ＤＮＡ片段酶诊断方法进行归类，以分子杂交、核酸序列测定、切与分子探针杂交，保证了检测的特异性。因此，分子构象变异与定量ＰＣＲ４大类对其历史沿革、一经推出后便成为探针杂交领域最为经典的分子技术原理与实践应用进行简要的介绍与评论，以检测方法，广为运用于各种基因突变，如缺失、插更好的回顾过去，展望分子诊断领域的未来。入、易位等，及与限制性酶切片段长度多态性（ｒｅ一、基于分子杂交的分子诊断技术ｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＲＦＬＰ）的鉴［２］上世纪

8、６０年代至８０年代是分子杂交技术发定中。Ａｌｗｉｎｅ等于１９７７年推出基于转印杂交展最为迅猛的２０年，由于当时尚无法对样本中靶的Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ技术也同样成为当时检测ＲＮＡ基因进行人为扩增，人们只能通过已知基因序列的金标准。的探针对靶序列进行捕获检测。其中液相和固相（二）ＡＳＯ反向斑点杂交（ａｌｌｅｌｅｓｐｅｃｉｆｉｃｏｌｉｇｏ杂交基础理论、探针固定包被技术与ｃＤＮＡ探针ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｒｅｖｅｒｓｅｄｏｔｂｌｏｔ，ＡＳＯＲＤＢ）人工合成的出现，为基于分子杂交的体