肌苷、肌苷酸的测定.pdf

《肌苷、肌苷酸的测定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、T/NAIA0003—2020ICS67.120X22团体标准T/NAIA0003—2020肌肉中肌苷肌苷酸的测定高效液相色谱法（征求意见稿）2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施宁夏化学分析测试协会发布T/NAIA0003—2020前言本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分标准的结构和编写》规定编写。本标准由宁夏化学分析测试协会提出并归口。本标准由宁夏大学、宁夏饲料工程技术研究中心、宁夏兽药饲料监察所、宁夏饲料工作站、宁夏农林科学院、宁夏昊标检测服务研究院、宁夏化学分析测试协会起草。本标准主要起草人：辛国省、刘辉、卜姣姣、燕翀、杨仪、丁园

2、、高巧仙、王建林、武晓宏、谢荣国、张小飞、张艳、王京。本标准于2020年XX月XX日首次发布。T/NAIA0003—2020肌肉中肌苷肌苷酸的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了肌肉中肌苷肌苷酸高效液相色谱法的测定。本标准适用于肌肉中肌苷肌苷酸的测定。本方法检测限为：0.01g/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单位）适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T9695.19肉与肉制品、取样方法3原理肌肉组织中肌苷肌苷酸经高氯酸溶液提

3、取后，通过调节pH值至6.5呈弱酸性，试液过滤膜进高效液相色谱仪经C18色谱柱分离，在254nm波长下紫外检测器（或性能相当的检测器）检测。4试剂与材料除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水4.1高氯酸。4.25%高氯酸：取5ml高氯酸加入95ml水中。4.3磷酸。4.4三乙胺。4.5甲醇（色谱纯）。4.6肌苷标准品（CAS：58-63-9，纯度不低于99.0%）。4.7肌苷标准储备液（0.8mg/mL）：称取肌苷标准品（4.6）20mg（准确至0,1mg）于25mL容量瓶中，用水定容。置于4℃冰箱保存，有效期3个月。4.8肌苷酸标准品（CAS:131

4、-99-7，纯度不低于99.0%）。4.9肌苷酸标准储备液（1mg/mL）：称取肌苷酸标准品（4.8）50mg（准确至0.1mg）于50mL容量瓶中，用水定容。置于4℃冰箱保存，有效期3个月。5仪器和设备T/NAIA0003—20205.1实验室用粉碎机或研钵。5.2分析天平：感量0.0001g。5.3均质机。5.4高效液相色谱仪：配紫外或二极管阵列检测器。5.5高速离心机。5.6超声波。5.7容量瓶：50mL、25mL。5.8移液管：玻璃移液管0.5mL、1mL、2mL、5mL。5.9砂芯过滤装置。6试样制备与保存取肌肉组织，加液氮研磨或粉碎后置于-80℃冰箱备用。注：在采样和

5、制备过程中，应避免试样污染，如长途运输应加液氮或冰袋保存。7测定步骤7.1试样提取平行做两份试验。称取2g（准确至0.0001g），置于50mL塑料离心管中，用20mL5%高氯酸溶液分3次匀浆，匀浆液在4℃下以4000r/min离心10min，上清液转入50mL烧杯中，沉淀物继续用5%的高氯酸5mL洗涤、离心，反复2次，合并上清液于50mL烧杯，用KOH溶液调pH至6.5，用蒸馏水定容至50mL，摇匀，经0.45um滤膜过滤装入进样小瓶待测。随同试样进行空白试验。除不称取样品外，均按试样步骤进行。7.2色谱条件色谱柱：C18，长250mm，内径4.6mm，粒径5um，或性能相当；

6、柱温：25℃；进样量：20ul；流动相：取3.5mL磷酸溶液加入200mL水和7.2mL三乙胺混匀，定容至1L，用三乙胺调pH6.5后取950mL加50mL甲醇混匀，经0.45um过滤，超声波脱气；流速：1mL/min;检测波长：254nm。7.3标准系列溶液准确吸取标准储备液（4.7、4.9）0、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL肌苷肌苷酸储备液分别置于25mL容量瓶中，用水定容。浓度分别为：肌苷：0、3.2ug/mL、6.4ug/mL、16g/mL、T/NAIA0003—202032ug/mL、64ug/mL。肌苷酸：0、4ug/mL、8ug/mL、20g/m

7、L、40ug/mL、80ug/mL。现配现用。7.4测定按照7.2给出参考色谱条件，依次上机测定标准系列溶液和试样溶液。7.5标准曲线绘制试样溶液与标准溶液中肌苷、肌苷酸保留时间相对偏差在±2.5%之内。在线性范围内，以肌苷、肌苷酸浓度为横坐标，以其响应值（峰面积）为纵坐标；绘制标准曲线，标准曲线相关系数不低于0.999。8分析结果的计算按式(1)计算试样中的肌苷、肌苷酸含量，其数值用mg/kg表示。肌苷、肌苷酸..................(1)式中：C—标准曲线下查的肌