A 型肉毒毒素 ELISA 鉴别试验方法的建立.pdf

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1、微生物学免疫学进展２０１５年８月第４３卷第４期ＰｒｏｇｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌＩｍｍｕｎｏｌ，Ａｕｇ．２０１５，Ｖｏｌ．４３Ｎｏ．４·３１··论著·Ａ型肉毒毒素ＥＬＩＳＡ鉴别试验方法的建立１１２１２１２萧在澜，王媛，顾磊，杨雨生，赵建荣，徐永浩，张华捷１．兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心，甘肃兰州７３００４６；２．中国食品药品检定研究院，北京１０００５０摘要：目的建立鉴定Ａ型肉毒毒素的ＥＬＩＳＡ鉴别试验方法以替代传统的动物试验法。方法采用现代免疫学技术，制备马源性和兔源性抗Ａ型肉毒毒素多克隆抗体，建立了双抗体夹心ＥＬＩＳＡ，

2、并就此初步进行方法学验证。结果所建立的ＥＬＩＳＡ具有良好的特异性、灵敏度、精密度和耐用性，具有替代动物试验方法的良好前景。结论在进一步验证和确认之后，该方法有望正式成为可用于鉴定Ａ型肉毒毒素的试验方法以替代动物试验法。关键词：注射用Ａ型肉毒毒素；鉴别试验；酶联免疫吸附分析；替代；动物试验法＋中图分类号：Ｒ３７８．８３文献标志码：Ａ文章编号：１００５-５６７３（２０１５）０４-００３１-０３DOI：１０．１３３０９／ｊ．ｃｎｋｉ．ｐｍｉ．２０１５．０４．００５EstablishmentofanELISAidentificationforbotuli

3、numtoxintypeA倡ＸＩＡＯＺａｉ-ｌａｎ，ＷＡＮＧＹｕａｎ，ＧＵＬｅｉ，ＹＡＮＧＹｕ-ｓｈｅｎｇ，ＺＨＡＯＪｉａｎ-ｒｕｎ，ＸＵＹｏｎｇ-ｈａｏ，ＺＨＡＮＧＨｕａ-ｊｉｅ倡LanzhouInstituteofBiologicalProductsCo．，Ltd．，CenterforGansuProvincialVaccineEngineeringResearch，Lanzhou730046，GansuProvince，ChinaCorrespondingauthor：ZHANGHua-jie，E-mail：zhjhz1979＠163．co

4、mAbstract：ObjectiveＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｅｗｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｆｏｒｂｏｔｕｌｉｎｕｍｔｏｘｉｎｔｙｐｅＡ（ｂｏｔＡ）ｔｏｒｅｐｌａｃｅｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｉｍａｌｔｅｓｔ．MethodsＡｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｂｏｄｙｓａｎｄｗｉｃｈＥＬＩＳＡｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｍｏｄｅｒｎｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｔｅｃｈｎｏｌｏ-ｇｙ，ｂｙｕｓｉｎｇｐｒｅｐａｒｅｄｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆａｎｔｉ-ｂｏｔＡｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｅｑｕｉｎ

5、ｅａｎｄｒａｂｂｉｔｏｒｉｇｉｎ，ａｎｄａｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｓｔｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＥＬＩＳＡｃｏｕｌｄｂｅａｐｏｔｅｎｔｉａｌａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｉｎｒｅ-ｐｌａｃｅｍｅｎｔｏｆａｎｉｍａｌｔｅｓｔ，ｉｔｉｓｏｆｇｏｏｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｐｒｅｃｉｓｉｏｎａｎｄｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓ．ConclusionＴｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｍｅｔｈｏｄｗｉｌｌｂｅｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｂｅａｐｐｒｏｖｅｄｆ

6、ｏｒｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｓｔｏｆｂｏｔｕｌｉｎｕｍｔｏｘｉｎｔｙｐｅＡａｓｔｈｅｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｉｍａｌｔｅｓｔｂｙａｆｕｒｔｈｅｒｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｖａｌｉｄａｔｉｏｎ．Keywords：ＢｏｔｕｌｉｎｕｍｔｏｘｉｎｔｙｐｅＡｆｏｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｓｔ；ＥＬＩＳＡ；Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ；Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｉｍａｌｔｅｓｔ注射用Ａ型肉毒毒素是一种以Ａ型肉毒毒素实验动物，已不符合当前对实验动物“３Ｒ”原则的要为有效成分的注射

7、剂，主要用于治疗和缓解肌肉痉求。英国动物学家Ｗｉｌｌｉａｍ和Ｒｅｘ曾于１９５９年提出挛性疾病，如眼睑痉挛、斜视等，也可用于除皱等医“３Ｒ”原则，即对于动物试验的替代（Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、［３］学美容领域。由于肉毒毒素有Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、减少（Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）和优化（Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ）的原则。随［１］Ｈ８种血清型，因此在对注射用Ａ型肉毒毒素的着社会经济的发展和人们对动物福利认识的不断提质量控制中，鉴别试验尤为重要。高，开发动物替代试验方法以减少实验动物的使用现行Ａ型肉毒毒素鉴别试验采用动物中和试已成为当今实验室检测技术发展的

8、一大趋势。在此［２］验法，通过将待检品与不同型别的肉毒抗毒素中背景下，研究拟通过建立可用于快速鉴别Ａ型肉毒和后注射小鼠，根据动物发病和死