双基因重组腺病毒载体的构建及转染大鼠骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤-论文.pdf

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1、中国组织工程研究事’8眷232014—06—04出版ChineseJournalofTissueEngineeringResearchJune4，2014VoL18,No．23www．CRTER．org双基因重组腺病毒载体的构建及转染大鼠骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤徐艳梅’，孙飞，惠春影。，王维(辽宁医学院附属第一医院，’重症医学科，。急诊科，。心脑外科，康复医学科，辽宁省锦州市121001)文章亮点：本文将低氧诱导因子1a基因的3个相关降解位点均进行了突变，这样不仅使得低氧诱导因子1a在常氧条件徐艳梅，女，1983年生，吉林省松原市人，汉族，下

2、可以表达，同时表达的效率也相应增加，同时将突变后的低氧诱导因子1a基因联合脑源性神经生长因子基2007年吉林大学护理学因共同应用于脊髓损伤这一疾病在目前国内尚少见相关报道。院毕业，护师，主要从事关键词：脊髓损伤的基因治疗。干镪瞻：干细跑移植：骨髓闻充质于细瞧；脊髓损伤：酗源性神经生长因子；低氧诱导因子le；血管内皮生长因子通讯作者：王维，硕士，副教授，辽宁医学院附属主题词：第一医院康复医学科，辽于细跑：骨髓：脊髓损伤神经生长因子：盘管内皮生长子类：晾病毒宁省锦州市121001基金资助：辽宁省科教厅社会发展处项目赘动《2Q12408002)doi：

3、103969／jissn20954344201423．007【http：／www．crter．org】摘要背景：脑源性神经生长因子对多巴胺能神经元、胆碱能神经元等多种神经元都有广泛作用，能促进干细胞更中图分类号：R394．2多的向神经元样细胞分化；低氧诱导因子1a可提高组织和细胞在缺血环境下的生存能力，维持局部成血管微文献标识码：B环境方面比任何基因均有更广泛的生理作用。文章编号：20954344目的：通过构建脑源性神经生长因子联合三点突变型低氧诱导因子1a双基因重组腺病毒载体，探索其转染大(2014)23-03645-08稿件接受：2014-0

4、3-08鼠骨髓间充质干细胞后2种基因在体外常氧条件下对脊髓损伤促神经再生及血管新生的作用。方法：①利用PCR方法定点突变人低氧诱导因子1a编码区的第402、564和803位氨基酸，将突变后低氧诱导因子1a基因联合脑源性神经生长因子重组入腺病毒pAdEasy．1系统，包装病毒并测定滴度。②以4种病毒液连同空白组共分5组进行后续实验；将病毒液转染入骨髓间充质干细胞内观察转染效率，检测各组转染细胞中脑源性神经生长因子基因及低氧诱导因子lamRNA和蛋白表达情况。⑤进一步通过Westernblot方法检测各组细胞中低氧诱导因子1a的下游成血管基因血管内皮

5、生长因子蛋白表达情况。结果与结论：①编码区第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸；4种腺病毒重组体构建成功并包装鉴定完毕。②实验组、阳性对照组1脑源性神经生长因子mRNA及蛋白表达量明显高于其他组(P<0．O5)；实验组、阳性对照组2细胞内低氧诱导因子lamRNA及蛋白表达量、血管内皮生长因子蛋白表达均明显高于其他3组(尸<0．05)。结果说明单载体双基因腺病毒系统转染骨髓间充质干细胞后不仅能够在常氧条件下大量且高效表达脑源性神经生长因子及低氧诱导因子1a蛋白，还同时能够促进其下游血管内皮生长因子的高效表达，为基因联合细胞移植治疗脊髓

6、损伤提供了一种新的方向。徐艳梅．孙飞．惠春影．王维．双基因重缓隙病毒载体的构建及转染大鼠骨髓闻充质于缅跑治疗脊髓损伤中国组织I程研究2014．18(23)：3645-3652TreatmentofspinalcordjnjurybytransfectionofdoublegenerecombinantadenovirusvectorintoratbonemarrowmesecnhymalstemcellsXuYan．mei’，SunFei，HuiChun．ying。，WangWei(’DepartmentofCriticalCareMedicin

7、e，DepartmentofEmergency,。DepartmentofCardiacandBrainSurgery,DepartmentofRehabilitationMedicine，FirstXUYah-mei，Seniornurse．AfiliatedHospitalofLiaoningMedicalUniversitY,Jinzhou121001，LiaoningProvince，China)DepartmentofCriticalCareMedicine，FirstAfiliatedAbstractHospitalofUaoning

8、MedicalBACKGR0UND：Brain-derivedneurotrophicfactor(BDNF)haswidespread